富含亮氨酸重复蛋白8A膜蛋白对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

摘要

目的 探讨干扰富含亮氨酸重复蛋白8A(LRRC8A)膜蛋白对心肌缺血再灌注(IR)损伤心脏功能的影响及可能机制.方法 选择SPF级健康雄性SD大鼠48只随机分为假手术组、模型组、基因沉默(LRRC8A-siRNA)组和空载体(Scrambled-siRNA)组,每组12只.模型组、基因沉默组和空载体组建立心肌IR损伤大鼠模型;假手术组不进行结扎.假手术组和模型组于术前24 h注射PBS,基因沉默组和空载体组则分别注射LRRC8A-siRNA、Scrambled-siRNA混合液;再灌注2h后检测左心室舒张期末内径(LVEDD)、左心室收缩期末内径(LVESD)、LVEF和左心室短轴缩短率(LVFS)及心肌活性氧、自噬相关蛋白LC3Ⅱ、溶酶体相关蛋白(LAMP2)、ATP、血清NF-κB、TNF-α和白细胞介素6(IL-6)、肌酸激酶(CK)、CK同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;观察心肌组织病理形态学变化;免疫组织化学法检测心肌LC3Ⅱ和LAMP2表达.结果 模型组LVEDD、LVESD、血清CK、CK-MB、LDH、活性氧、NF-κB、TNF-a、IL-6水平及LC3Ⅱ表达明显高于假手术组,而LVEF、LVFS、ATP水平及LAMP2表达明显低于假手术组,差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较,基因沉默组LVEDD、LVESD、血清CK、CK-MB、LDH、活性氧、NF-κB、TNF-a和IL-6水平及LC3Ⅱ表达明显降低(P＜0.01),而LVEF[(0.65±0.04)％vs (0.42±0.08)％]、LVFS[(48.91±3.01)％vs(28.63±8.17)％]、ATP水平[(11.1±0.2) ng/g vs(0.9±0.1) ng/g]及LAMP2表达(5.23±0.50 vs 0.41±0.03)明显升高(P＜o.01);空载体组各指标与模型组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).光学显微镜下可见,基因沉默组心肌细胞形态基本正常,较少发生炎性细胞浸润.结论 干扰LRRC8A膜蛋白能够通过抑制活性氧过量产生、炎症及过度自噬,保护心肌线粒体功能,达到预防心肌IR损伤及保护心脏功能的作用.