膜蛋白LRRC8A在小鼠心肌细胞的表达及电生理特性

摘要

目的 探讨容积敏感性氯通道蛋白主要成分LRRC8A在小鼠心肌细胞的表达及电生理特性.方法 采用原代培养的小鼠乳鼠心肌细胞,上海吉玛公司合成4个不同LRRC8A的小干扰RNA(siRNA),片段依次为A组、B组、C组和D组,另将1个不包含siRNA的片段作为NC组.将含LRRC8A siRNA片段的腺病毒感染心肌细胞,用等渗、低渗、低渗加DCPIB、低渗加siRNA外液灌流.RT-PCR法和Western Blot法检测各组LRRC8A在心肌细胞的表达;应用膜片钳检测各种状态下LRRC8A电生理特性(ICLvol)的变化.结果 心肌细胞能正常表达LRRC8A,腺病毒成功感染细胞后,与NC组比较,A、B、C和D组LRRC8A mRNA及蛋白表达量均降低(P＜0.05).与等渗外液比较,低渗外液ICLvol明显升高,与低渗外液比较,低渗加DCPIB外液的ICLvol降低,抑制率达到(96.48±2.63)％(P＜0.01),与低渗外液比较,低渗加siRNA外液的电流密度值下降达(83.04±8.41)％(P＜0.01).结论 LRRC8A是小鼠心肌细胞膜重要的组成成分,是容积敏感性氯通道的重要构成蛋白.