膜片钳术

摘要： 目的 证实新生大鼠前庭内侧核(MVN)与前庭传出(VE)神经元之间的直接投射通路并观察该通路的电生理特性.方法 选用新生(9±1)d的Wistar大鼠,雌雄不限.通过全细胞膜片钳记录技术,刺激MVN,记录VE的突触后电流;逆行刺激脑干面神经膝部(g7)内侧VE的分布区,记录MVN区域传入神经元的动作电位,并使用生物胞素染色方法明确被记录的神经元的位置和形态.结果 在电流钳记录中,位于g7内侧的VE神经元静息膜电位范围为-70～-55mV.单脉冲电流(0.08 mA,0.1 Hz,100 μs)刺激MVN前庭传入神经元,在同侧g7内侧的VE神经元可记录到兴奋性突触后电流,其幅度和持续时间分别为(195.6±23.7)pA和(23.9±5.9)ms.电刺激g7内侧VE神经元分布区后,MVN神经元可记录到逆行动作电位,幅度为(62.0±4.3)mV,持续时间为(94.9±4.7)ms.生物胞素染色标记也显示投射到g7内侧VE分布区的神经元胞体位于MVN内.结论 MVN的前庭传入神经元存在直接投射到g7内侧VE神经元的兴奋性通路,其生理功能可能与前庭中枢对外周前庭传入的反馈调节有关.

摘要： 目的 研究神经病理性疼痛状态下,不同大小背根神经节(DRG)神经元兴奋性分型的特点,探讨不同大小DRG神经元兴奋性分型与神经病理性疼痛的关系.方法 将SD大鼠随机分成正常组(Control组)、假手术组(Sham组)和坐骨神经分支选择性损伤模型组(SNI组).运用热和冷刺激实验观察大鼠疼痛行为学变化;运用膜片钳技术记录不同大小DRG神经元兴奋性分型变化.结果 与Control组比较,SNI组大鼠热缩足潜伏期无改变,但冷刺激抬足时间增加(P0.05).结论 不同大小的DRG神经元兴奋性分型的改变是产生神经病理性疼痛的机制之一.

摘要： 目的 探讨1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)对小鼠黑质多巴胺能神经元兴奋性的影响。方法 选用出生15~20d的C57BL/6小鼠制备脑片,运用脑片全细胞膜片钳技术观察MPP+对黑质多巴胺能神经元自发放电及诱发放电的影响。结果 当小鼠黑质脑片灌流10μmol/L MPP+5min后,多巴胺能神经元自发放电频率明显升高(t=3.443,P<0.05);灌流15min左右,多巴胺能神经元自发放电频率显著减慢(t=4.172,P<0.01);延长灌流时间至25min左右时,多巴胺能神经元的放电活动可被完全抑制。在灌流MPP+5min后,多巴胺能神经元诱发放电频率明显升高(t=4.472,P<0.05),峰电位间隔时间明显缩短(t=48.390,P<0.01)。结论 MPP+能够以时间依赖性的方式抑制正常小鼠黑质多巴胺能神经元的兴奋性。

摘要： 目的 观察通心络对腹主动脉缩窄高血压豚鼠心肌肥厚的影响,探讨其抗心律失常可能的机制.方法 选择豚鼠60只,随机分为假手术组、模型组和通心络组,每组20只.假手术组只分离腹主动脉,不做结扎,灌胃8周.模型组及通心络组采用腹主动脉缩窄法建立心肌肥厚模型成功后,分别以蒸馏水、通心络溶于蒸馏水灌胃8周.测量各组舒张末期室间隔厚度(IVSTD)、左心室舒张末期后壁厚度(LVPWTD),记录心肌细胞膜电容、慢激活延迟整流钾电流通道(Iks)及快激活延迟整流钾电流通道(Ikr)电流密度.结果 与假手术组比较,模型组和通心络组IVSTD和LVPWTD明显升高,且通心络组IVSTD及LVPWTD明显低于模型组,差异有统计学意义[(1.65±0.06)mm vs (1.88±0.05)mm,(1.74±0.11)mm vs (2.19±0.12)mm,P＜0.05].3组心肌细胞膜电容比较,差异有统计学意义(P=0.003).通心络组心肌细胞Ikr、Iks电流密度明显低于模型组,差异有统计学意义[(2.46±0.21)pA/pF vs (3.16±0.21)pA/pF,(10.09±1.07)pA/pF vs(13.76±0.19)pA/pF,P＜0.05].结论 通心络能阻断肥厚心肌细胞异常增大的电压依赖性钾离子电流,可能是干预肥厚心肌细胞电生理异常的重要机制之一.

摘要： 目的 探讨容积敏感性氯通道蛋白主要成分LRRC8A在小鼠心肌细胞的表达及电生理特性.方法 采用原代培养的小鼠乳鼠心肌细胞,上海吉玛公司合成4个不同LRRC8A的小干扰RNA(siRNA),片段依次为A组、B组、C组和D组,另将1个不包含siRNA的片段作为NC组.将含LRRC8A siRNA片段的腺病毒感染心肌细胞,用等渗、低渗、低渗加DCPIB、低渗加siRNA外液灌流.RT-PCR法和Western Blot法检测各组LRRC8A在心肌细胞的表达;应用膜片钳检测各种状态下LRRC8A电生理特性(ICLvol)的变化.结果 心肌细胞能正常表达LRRC8A,腺病毒成功感染细胞后,与NC组比较,A、B、C和D组LRRC8A mRNA及蛋白表达量均降低(P＜0.05).与等渗外液比较,低渗外液ICLvol明显升高,与低渗外液比较,低渗加DCPIB外液的ICLvol降低,抑制率达到(96.48±2.63)％(P＜0.01),与低渗外液比较,低渗加siRNA外液的电流密度值下降达(83.04±8.41)％(P＜0.01).结论 LRRC8A是小鼠心肌细胞膜重要的组成成分,是容积敏感性氯通道的重要构成蛋白.

摘要： 目的 采用膜片钳技术研究食欲素受体(OxR)通路对海马CA1区锥体神经元放电的影响.方法 将Wistar大鼠取脑,急性分离单个CA1区锥体神经元.选140例神经元,用膜片钳技术记录电活动,根据神经元自身放电频率分为低频和高频,神经元分别用人工脑脊液(低频对照组60例和高频对照组22例),食欲素A受体激动剂(O6012 200 nmol/L,低频实验组48例和高频实验组10例),O6012 200 nmol/L和选择性OxR1拮抗剂1 SB334867混合液(低频拮抗组7例和高频拮抗剂组1例)刺激,观察低频实验组28例和高频实验组4例给药前、给药期间和停止给药的电活动变化.结果 低频实验组激活58.3％神经元,给药期间神经元放电频率明显高于给药前(5.36±4.01 Hz vs 1.43±0.88 Hz,P＜0.05);停止给药后与给药期间和给药前放电频率比较,无统计学差异(P＞0.05).高频组激活40.0％神经元,给药期间神经元放电频率明显高于给药前[(6.98±2.45)Hz vs (4.93±2.55)Hz,P＜0.05],停止给药后与给药期间比较放电频率显著减少(P＜0.05),停止给药后与给药前比较,无统计学差异(P＞0.05).结论 海马CA1区锥体神经元上可能存在OxR;激活OxR可兴奋神经元,并介导某些神经活动.

摘要： Objective To set up a protocol for preparing brain slices of subthalamic nucleus (STN) of adult rat.Methods Adult male or female Sprague-Dawley (SD) rats of 280-450 g in weight were arterially perfused by ice cold cutting solution ,then quickly chopped into 300 μm coronary brain slices containing STN. Sodium chloride was replaced by choline chloride in the cutting solution. The time of taking the brain was strictly controlled within 30 s. Antioxidants were added into incubation solution to keep the viability of the brain cells. The propidium iodide (PI) staining was used to detect the dead neurons. The neuronal morphology of brain slices were observed by using infrared differential interference phase contrast microscopy. Electrophysiological properties of STN neurons were recorded by whole-cell patch clamp. Results At high magnification ,we found that the cell contour of STN neurons was clear. The surface was smooth ,full ,and stereo three-dimensional shape. The PI staining showed that these neurons were alive. The membrane potential amplitude of STN neurons was (-46.4 ± 1.26) mV. Membrane resistance was (493.1 ± 62.29) MΩ. In the total 64 recorded STN neurons ,28 neurons showed spontaneous discharge. Action potential threshold was (-28.3 ± 1.20) mV. Action potential amplitude was (68 ± 2.27 ) mV. The half-width of action potential was (0.8 ± 0.06 ) ms and hyperpolarization-activated cation current (Ih ) amplitude was (42.0 ± 6.09) pA. Conclusions The adult rat brain slices of STN prepared by this method can maintain the viability of STN neurons ,which is suitable for the study of the mechanism of degenerative diseases such as Parkinson's disease and other neurodegenerative diseases in the animal models.%目的 建立一种制备健康成年Sprague-Dawley(SD)大鼠丘脑底核(subthalamic nucleus,STN)离体脑片的方法.方法 选取成年SD大鼠,体重280～450 g,给予大鼠4°C氯化胆碱切片液主动脉灌流后取脑,取脑时间尽量控制在30 s内,振动切片机制备含有STN的冠状脑片.同时采用其他保护脑片细胞活性的措施,如人工脑脊液中添加抗氧化剂,脑片制备全程注意保持低温冰浴状态等.利用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色法观察神经元活性.通过红外微分干涉相差显微镜(IR-DIC)观察脑片的神经元形态.全细胞膜片钳记录大鼠STN神经元的电生理学指标.结果 40倍镜下显示,大量STN神经元轮廓清晰、表面光滑、饱满、有立体感,PI染色为阴性.进行全细胞膜片钳记录时,封接顺利,获得的STN神经元电生理指标如下:静息膜电位为(-46.4±1.26)m V,膜电阻为(493.1±62.29)MΩ,有自发放电的神经元占记录细胞总数的43.8％(28/64),动作电位阈值为(-28.30±1.20)mV,动作电位幅度为(68.00±2.27)mV,动作电位半宽为(0.80±0.06)ms,基强度为(42.0±6.09)pA.结论 本方法制备的成年SD大鼠STN离体脑片保证了STN神经元的活性,适用于诸如帕金森病等神经系统退行性疾病动物模型离体机制研究.

摘要： 目的:研究环维黄杨星D对分离的大鼠心室肌细胞内Ca2+动员和L型钙电流(Lca-L)的影响。rn 方法:采用全细胞膜片钳术和激光扫描共聚焦显微术研究环维黄杨星D对大鼠心室肌细胞Ica-L以及氯化钾，咖啡因诱发的大鼠心室肌细胞内Ca2+动员的影响。rn 结果:环维黄杨星D浓度依赖性抑制Ica-L，在指令电压为10 mV时，1和10μmol·L-1分别使Ica-L电流密度从给药前的(-9.9±1.8)pA/pF降至(-6.4±1.4)pA/pF和(-4.2±0.6)pA/pF。共聚焦实验显示环维黄杨星D 1和10μmol·L-1不影响静息状态下的心肌细胞内[Ca2+]I，但10μmol·L-1可明显延长氯化钾诱发的心肌细胞内[Ca2+]I达峰时间，对峰值浓度无明显作用；10mm01·L-1咖啡因迅速引起细胞内[Ca20]；升高，5 min后细胞内[Ca2+]I下降94％，咖啡因引起细胞内[Ca2+]I的升高可被环维黄杨星D进一步增高。rn 结论:环维黄杨星D浓度依赖性抑制分离大鼠心室肌细胞Ica-1，并有增强咖啡因诱发心肌细胞内Ca2+释放的作用。

摘要： 一种平面膜片钳装置，具有：电绝缘性基板(2)，其在细胞配置区域(4)内具有不使细胞通过但能够使液体通过的贯通孔(3)；第一贮液部(6)，其以能够与贯通孔(3)连通的方式设置在基板(2)的第一表面(2S)侧，且保持第一导电性液体；第一电极部(7)，其配置为能够与第一贮液部(6)电导通；第二贮液部(6′)，其以能够与贯通孔(3)连通的方式设置在基板(2)的第二表面(2S′)侧，且保持第二导电性液体；第二电极部(7′)，其配置为能够与第二贮液部(6′)电导通；送液流路(8)，其向第二贮液部(6′)输送第二导电性液体；排液流路(9)，其从第二贮液部(6′)排出第二导电性液体；以及阀(10)，其设置于送液流路(8)以及/或者排液流路(9)，能够允许或者停止第二导电性液体的流通，并且能够允许或者停止第二贮液部(6′)与第二电极部(7′)的电导通。

摘要： 本发明描述了一种聚合物材料的箔，它包括多个膜片部分和在所述膜片之间排列的网格部分。每一膜片部分通过一个或多个连接元件与网格部分相连。在X‑Y平面内每一膜片部分通过剥离部分与网格部分相分离，所述剥离部分在X‑Y平面内的拉伸强度低于所述膜片部分和所述网格部分二者的拉伸强度，使得一旦在所述膜片部分和所述网格部分之间采用拉伸力，则所述箔优先在所述剥离部分处断裂。本发明涉及使用所述箔，生产细胞‑捕获芯片的方法，和通过所述方法生产的细胞捕获芯片。

摘要： 本发明公开了一种细胞膜片钳实验中内面向外式膜片的构建方法，该方法包括，按照常规技术手段进行内面向外式膜片钳实验，当电流记录过程中检测到的电流信号减小或消失时，将电极从浴液中提起暴露于空气中，用恒定压强、流速均匀的气流，对准电极尖端吹气，吹气完成后，将电极放入浴液中，此时囊泡消除，内面向外式膜片形成。本发明方法简单方便，能快速有效的使电极尖端形成的囊泡破裂并形成单层膜片，特别适用于膜片钳技术内面向外式构型形成中容易产生囊泡及囊泡结构稳定、不易破裂的状况，可克服内面向外式膜片钳实验中电极尖端易形成囊泡的缺陷，提高实验成功率。

摘要： 一种平面膜片钳装置，具有：电绝缘性基板(2)，其在细胞配置区域(4)内具有不使细胞通过但能够使液体通过的贯通孔(3)；第一贮液部(6)，其以能够与贯通孔(3)连通的方式设置在基板(2)的第一表面(2S)侧，且保持第一导电性液体；第一电极部(7)，其配置为能够与第一贮液部(6)电导通；第二贮液部(6′)，其以能够与贯通孔(3)连通的方式设置在基板(2)的第二表面(2S′)侧，且保持第二导电性液体；第二电极部(7′)，其配置为能够与第二贮液部(6′)电导通；送液流路(8)，其向第二贮液部(6′)输送第二导电性液体；排液流路(9)，其从第二贮液部(6′)排出第二导电性液体；以及阀(10)，其设置于送液流路(8)以及/或者排液流路(9)，能够允许或者停止第二导电性液体的流通，并且能够允许或者停止第二贮液部(6′)与第二电极部(7′)的电导通。

摘要： 本发明描述了一种聚合物材料的箔，它包括多个膜片部分和在所述膜片之间排列的网格部分。每一膜片部分通过一个或多个连接元件与网格部分相连。在X‑Y平面内每一膜片部分通过剥离部分与网格部分相分离，所述剥离部分在X‑Y平面内的拉伸强度低于所述膜片部分和所述网格部分二者的拉伸强度，使得一旦在所述膜片部分和所述网格部分之间采用拉伸力，则所述箔优先在所述剥离部分处断裂。本发明涉及使用所述箔，生产细胞‑捕获芯片的方法，和通过所述方法生产的细胞捕获芯片。

摘要： 本发明公开了一种细胞膜片钳实验中内面向外式膜片的构建方法，该方法包括，按照常规技术手段进行内面向外式膜片钳实验，当电流记录过程中检测到的电流信号减小或消失时，将电极从浴液中提起暴露于空气中，用恒定压强、流速均匀的气流，对准电极尖端吹气，吹气完成后，将电极放入浴液中，此时囊泡消除，内面向外式膜片形成。本发明方法简单方便，能快速有效的使电极尖端形成的囊泡破裂并形成单层膜片，特别适用于膜片钳技术内面向外式构型形成中容易产生囊泡及囊泡结构稳定、不易破裂的状况，可克服内面向外式膜片钳实验中电极尖端易形成囊泡的缺陷，提高实验成功率。

摘要： 本发明涉及一种双层脑片孵育槽和膜片钳系统，所述双层脑片孵育槽包括容器和固定在所述容器内的双层滤膜结构，所述双层滤膜结构包括第一滤膜层和设置在所述第一滤膜层上的第二滤膜层，所述第一滤膜层的一半为滤膜结构，另一半为镂空滤网结构，所述第二滤膜层为一个表面充满小孔的滤筛小槽，所述滤筛小槽设置在所述滤膜结构上且面积小于所述滤膜结构，该双层脑片孵育槽采用双层设计，并通过镂空滤网结构来释放气泡，以此不仅可以实现氧饱和人工脑脊液对脑片的孵育效果，还能有效减少气泡对于脑片的物理冲击，减小实验中意外气流变化等对脑细胞活性的影响，同时滤膜结构对脑片的影响也远远小于滤网，能够有效减少对脑细胞的机械损伤。

摘要： 本申请涉及一种膜片钳记录分析方法与系统，包括：获取记录电极的尖端目标位置以及获取被测细胞的细胞目标位置；其中，细胞目标位置与尖端目标位置均根据显微镜的视野图像数据与预设目标分类模型得到；根据细胞目标位置与尖端目标位置进行转换，得到平面移动位移；根据平面移动位移输出移动指令至微操装置控制记录电极移动至与被测细胞接触；输出负压控制指令至压力装置，以使压力装置提供预设负压至记录电极完成与被测细胞的封接和/或破膜。采集显微镜的视野图像数据进行图像识别获取记录电极与被测细胞的位置，控制记录电极完成与被测细胞接触、封接与破膜，不仅具有较高的精度与准确率，且过程避免依赖经验积累，也降低了时间成本与人力成本。

摘要： 本发明提供了一种用于膜片钳记录的多功能平台及其使用方法，包括记录平台，所述记录平台上设置有储液槽、脑片放置槽和探头放置槽；所述储液槽和脑片放置槽相互连通；所述脑片放置槽和探头放置槽相互连通。本发明首先将原分散功能有机合理地整合到记录浴槽中，解决了记录槽布线及各设备有序放置的问题，从而降低了记录噪音，节省了空间；新增加一个探头放置槽，解决了接地电极随意摆放影响记录的问题，从而解决了参比电极随意摆放摆动影响记录效果的问题；通过有机地增加了温度传感器及pH传感器可监测aCSF pH及温度,从而可以实时监测aCSF的状态。

摘要： 本实用新型公开了一种膜片钳银丝以及用于膜片钳银丝的电镀装置，其包括电镀盒体、电镀盖体和电源模块，所述电镀盒体与电源模块的负极连接用于放置电镀液，所述电镀盖体与电源模块的正极连接，所述电镀盖体用于固定膜片钳银丝，这样，本实用新型利用电镀的原理设计用于膜片钳银丝的电镀装置，能够快速、便携、稳定地对膜片钳银丝进行电镀，并且能够在膜片钳银丝的表面获得一层致密、均匀、牢固的AgCl层；此外，采用本实用新型对膜片钳银丝进行电镀，是直接对银丝和膜片钳探头焊接后的膜片钳银丝进行电镀，能够避免将银丝与连接金属拆卸、电镀、电焊的步骤，同时便于银丝的安装，操作简单，极大地提高了电镀的效率。