TNF-α刺激下牙周膜干细胞与CD3+T细胞共培养对Wnt/β-catenin信号通路的影响

摘要

目的:探讨炎症条件下牙周膜干细胞与CD3+T细胞共培养对经典Wnt/β-catenin信号通路的影响.方法:拔除健康前磨牙及第三磨牙,获取健康牙周膜干细胞(H-pDLSCs);人外源性TNF-α炎症因子10ng/mL刺激PDLSCs(I-PDLSCs).免疫荧光染色检测H/I-PDLSCs Wnt通路蛋白β-catenin和LEF-1的表达.采用免疫磁珠法获取人的CD3+T细胞.H/I-PDLSCs与CD3+T细胞分别以1∶10,1∶20,1∶50,1∶100共培养,共培养48h,提取各组PDLSCs的RNA,反转录为cDNA后,qPCR检测β-catenin、LEF1、TCF4的基因表达;以上述比例共培养后收集各组细胞进行流式细胞仪细胞周期检测.结果:免疫荧光检测I-PDLSCs组β-catenin、LEF-1的表达强于H-PDLSCs组.共培养比例为1∶20和1∶50时,H-PDLSCs组β-catenin、LEF1的mRNA表达水平均降低;1∶20时TCF4 mRNA的表达水平增加,1∶50时降低.1∶20时,I-PDLSCs组β-catenin、LEF1的mRNA表达水平均增加,而在1∶50时基因的表达水平均降低.1∶20及1∶50时TCF4的表达水平均降低.H-PDLSCs与CD3+T细胞共培养比例为1∶10时与H-PDLSCs对照组相比其增殖指数显著提高;1∶20、1∶50及1∶100时其PI指数显著降低.I-PDLSCs与CD3+T细胞共培养比例为1∶10、1∶50及1∶100时与I-PDLSCs对照组相比其增殖指数显著降低(P＜0.05).结论:炎症条件可激活牙周膜干细胞的Wnt/β-catenin信号通路,H/I-PDLSCs与CD3+T细胞以1∶20、1∶50可稳定的下调Wnt/β-catenin经典信号通路,证实Wnt通路参与炎症条件下PDLSCs的免疫调节.