Claudin-7基因敲除诱导小鼠肠道炎症及其致癌机制的研究

摘要

目的初步探讨Claudin-7（Cln-7）基因敲除诱导小鼠肠道炎症及其致癌的机制。方法 Cln-7基因敲除组小鼠和正常对照组小鼠出生4 d后被处死并观察其肠道黏膜病理变化;采用蛋白印迹技术检测NF-κB p65、P-p65、P-IκBα、磷酸化组蛋白H3和环氧合酶-2在小鼠肠道中的表达情况;采用实时荧光定量PCR技术检测小鼠肠道组织中炎症因子IL-1β、IL-6、TNFα的基因表达水平;采用免疫组化技术检测43例结直肠癌患者肿瘤标本及15例正常大肠黏膜组织中Cln-7蛋白的表达,并分析其与临床病理因素之间的关系。结果 Cln-7基因敲除小鼠在出生4 d左右即出现明显脱水、且停止生长,并在出生后7 d左右死亡。Cln-7基因敲除小鼠肠道黏膜出现明显的炎症、增殖现象;基因敲除小鼠肠道组织中NF-κB p65、P-p65、P-IκBα、磷酸化组蛋白H3、环氧合酶-2蛋白表达比对照组小鼠均显著升高（P＜0.01）;Real-time PCR结果表明基因敲除小鼠肠道组织中IL-1β、IL-6和TNFα的mRNA水平与对照组小鼠比较差异均具有统计学意义[小肠分别为（24.45±0.12）比（0.35±0.42）,t=8.468,P=0.001;（34.26±0.10）比（1.63±0.05）,t=8.673,P=0.001;（12.35±0.02）比（1.37±0.01）,t=4.743,P=0.025。大肠分别为（31.25±0.15）比（1.56±0.02）,t=5.436,P=0.005;（21.75±0.11）比（1.97±0.02）,t=4.217,P=0.025;（18.25±0.09）比（1.66±0.01）,t=4.217,P=0.025)]。免疫组化结果显示Cln-7在大肠癌组织中的表达明显低于正常大肠组织,且与大肠癌分化程度（χ~2=12.421,P=0.001）和有无肝脏及淋巴结转移有关（χ~2=9.462,P=0.001;χ~2=9.875,P=0.001）。结论敲除Cln-7基因可通过激活NF-κB等通路诱导肠道炎症,参与了结直肠癌的发生和发展过程;Cln-7基因可能是潜在的抑癌基因。