钙网蛋白在胆囊癌组织中的表达及对胆囊癌细胞生物学行为影响

摘要

目的探讨钙网蛋白（calreticulin CRT）在胆囊癌中的表达及其对胆囊癌细胞GBC-SD细胞生物学行为影响。方法利用免疫组织化学及RT-qPCR检测CRT在胆囊癌组织中的表达,小干扰RNA转染技术沉默胆囊癌GBC-SD细胞CRT表达,通过Western blotting检测转染效果,cell counting kit-8（CCK-8）及平板克隆实验检测细胞的增殖能力;采用流式细胞技术检测细胞凋亡及细胞周期的变化;运用划痕及transwell侵袭小室检测细胞迁移能力;Western blotting方法检测p-Akt及MMP-9蛋白表达。结果与癌旁及慢性胆囊炎组织比较,CRT mRNA在胆囊癌组织中高表达（t=5.571,P＜0.05）。siCRT-1、siCRT-2实验组24 h和48 h相对存活率分别为71.5%±6.3%,79.5%±2.7%;62.6%±8.8%,55.6%±2.6%。空白组,阴性对照组,siCRT-1,siCRT-2的凋亡率分别为3.0%±1.8%,4.7%±1.3%,13.6%±1.0%,20.0%±4.0%。划痕实验显示:空白组,阴性对照组,siCRT-1,siCRT-2的划痕修复率分别为（0.67±0.02）,（0.58±0.02）,（0.22±0.01）,（0.37±0.04）。Transwell结果显示,空白组,阴性对照组,siCRT-1,siCRT-2的细胞穿膜个数分别为（302±11）,（297±15）,（178±10）,（165±12）。与空白组及阴性对照组比较,siCRT-1,siCRT-2实验组24,48 h相对存活率明显降低,凋亡上升,迁移能力下降（分别F=29.310,118.618,69.651,144.515,190.145,均P＜0.05）。沉默CRT表达后,与空白组及阴性对照组比较,p-Akt及MMP-9蛋白表达水平均下调。结论 CRT在胆囊癌中高表达,CRT表达下调介导的胆囊癌生物学行为的改变可能与p-Akt/MMP-9通路相关。