鲤mstn基因RNA干涉载体构建与检测分析

摘要

肌肉生长抑制素(Myostation,MSTN)是影响肌肉生长的负调控因子,其缺失或突变会导致肌肉量的增加.本研究参照鲤(Cyprinus carpio)高通量转录组测序数据的拼接结果,筛选出针对mstn基因的siRNA序列(19 bp保守同源序列),合成siRNA转录模板的发夹结构,构建包含斑马鱼(Danio rerio)U6启动子、干涉片段siM-STN和鲤mstn的供体质粒pzu6p-siMSTN.通过显微注射方法,获得一批转鲤mstn基因的转基因鲤.经PCR检测,转基因鲣mstn外源基因的平均整合率为36.2％,对其中5尾转基因阳性鲤的扩增产物进行回收、克隆和测序验证.结果 表明:转基因阳性鲤中均含有转基因目的 片段,说明鲤mstn基因RNA干涉载体可在鲤中实现基因整合,为进一步获得具有特殊功能的转基因鱼类提供新的方法.