两面神激酶2/信号传导及转录激活因子3信号通路在地塞米松诱导成骨细胞MC3T3-E1凋亡中的作用

摘要

目的探讨两面神激酶2/信号传导及转录激活因子3（JAK2/STAT3）信号通路在地塞米松（DEX）诱导成骨细胞MC3T3-E1凋亡中作用机制。方法将成骨细胞MC3T3-E1分为3组, 分别为对照组、DEX组、DEX+AG490组。对照组只加入正常培养基, DEX组加入200 μmol/L的DEX培养, DEX+AG490组预先给予50 μmol/L的AG490处理后加入200 μmol/L的DEX培养。采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞活力, 流式细胞术检测细胞凋亡率, 蛋白印迹法检测通路蛋白及凋亡蛋白的表达。组间比较采用t检验。结果对照组、DEX组、DEX+12.5、25、50、75 μmol/L的AG490的细胞存活率分别为（97.74±1.45）%、（52.05±5.50）%、（54.98±3.77）%、（70.99±4.15）%、（81.53±6.43）%、（79.16±7.35）%。表明DEX明显使成骨细胞MC3T3-E1活力降低（t=11.364, P＆0.001）, 50 μmol/L JAK2/STAT3通路抑制剂（AG490）明显抑制了DEX对成骨细胞MC3T3-E1活力的降低作用（t=4.928, P＆0.01）。对照组、DEX组、DEX+AG490组的细胞凋亡率分别为（6.067±0.545）%、（26.233±2.631）%和（8.463±1.179）%。表明DEX明显诱导成骨细胞MC3T3-E1凋亡（t=12.999, P＆0.001）, 经AG490处理后, DEX诱导的成骨细胞MC3T3-E1凋亡明显受到抑制（t=10.675, P＆0.001）。蛋白质印迹法（Western blot）检测正常组、DEX组、DEX+AG490组p-JAK2蛋白表达分别为1.000±0.323、2.839±0.640、0.286±0.068, p-STAT3蛋白表达分别为1.000±0.245、3.471±0.157、0.618±0.078, bax蛋白表达分别为1.000±0.083、6.571±0.405、3.048±0.905, bcl-2蛋白表达分别为1.000±0.086、0.207±0.040、0.563±0.083, cleaved Caspase-3蛋白表达分别为1.000±0.192、5.685±0.699、3.411±0.247。DEX组较对照组p-JAK2、p-STAT3、cleaved Caspase-3、bax的表达明显增加, bcl-2的表达明显减少（t=4.429、14.912、11.100、23.561、14.565, P＆0.05）, AG490+DEX组较DEX组p-JAK2、p-STAT3、cleaved Caspase-3、bax的表达明显减少, bcl-2的表达明显增加（t=6.860、28.404、5.262、6.185、6.721, P＆0.01）。结论 DEX通过JAK2/STAT3信号通路, 调节cleaved Caspase-3、bax、bcl-2的表达, 诱导成骨细胞MC3T3-E1凋亡。