猪脱细胞真皮基质调控肿瘤坏死因子-α对毛囊角质形成细胞淋巴增强因子1和细胞核增殖抗原表达的作用

摘要

目的 探讨猪脱细胞真皮基质(pADM)在体外培养中对毛囊角质形成细胞增殖的影响及其机制.方法 体外实验培养毛囊角质形成细胞,按照干预措施不同分为6 组,A 组为单纯毛囊角质形成细胞组;B 组为毛囊角质形成细胞+pADM 组(20 mg/L);C 组为毛囊角质形成细胞+肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组(10 μg/L);D组为毛囊角质形成细胞+TNF-α抑制剂组(Lenalidomide);E组为毛囊角质形成细胞+TNF-α(10 μg/L)+pADM 组(20 mg/L);F 组为毛囊角质形成细胞+TNF-α抑制剂+pADM 组(20 mg/L).用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法分别测定各组的淋巴增强因子1(LEF-1)mRNA及细胞核增殖抗原(Ki-67)mRNA 的表达.免疫荧光标记法检测B、E、F组的毛囊角质形成细胞,观察pADM 对毛囊角质形成细胞增殖的影响.两组间比较采用独立样本t 检验.结果 A 组(LEF-1,1.093±0.121,Ki-67,1.100±0.089)毛囊角质形成细胞中LEF-1 mRNA及Ki-67 mRNA 的表达低于B 组(LEF-1,2.973±0.234,Ki-67,2.577±0.067)和D 组(LEF-1,1.867±0.045,Ki-67,1.967±0.136),但高于 C 组(LEF-1,0.450±0.090,Ki-67,0.490±0.026).A组与B 组、A组与C 组、A组与D 组之间的差异均有统计学意义(A 比B,tLEF-1 = 14.280,P＜0.05;tKi-67 = 15.390,P＜0.05;A 比 C,tLEF-1 = 4.887,P＜0.05;tKi-67 = 6.356,P＜0.05;A 比 D,tLEF-1 = 5.875,P＜0.05;tKi-67 = 9.030,P＜0.05);B 组(LEF-1,2.973±0.234,Ki-67,2.577±0.067)毛囊角质形成细胞中LEF-1 mRNA 及Ki-67 mRNA 的表达高于E 组(LEF-1,1.793±0.078,Ki-67,1.940±0.165),而低于F组(LEF-1,4.257±0.266,Ki-67,3.193±0.155),B 组与E 组,B 组与F组的差异均有统计学意义(B 比E,tLEF-1 = 8.964,P＜0.05;tKi-67 = 6.634,P＜0.05;B 比F,tLEF-1 =9.749,P＜0.05;tKi-67 =-6.425,P＜0.05);免疫荧光结果显示,B 组毛囊角质形成细胞数量高于E组而低于F组.结论 在体外培养中,pADM 可能通过下调TNF-α促进LEF-1 和Ki-67 的表达,从而促进毛囊角质形成细胞的增殖.