冻存对犬脂肪干细胞特性的影响

摘要

目的研究冻存对犬脂肪干细胞（ADSC）生物学特征及体外诱导分化能力的影响。方法 2017年2月至5月, 取自上海市第六人民医院动物实验室雄性6月龄比格犬腹股沟处脂肪组织, 采用胶原酶消化法分离培养ADSC, 设置冻存组和非冻存组, 其中冻存组, 将犬ADSC传至第2代, 予以-196 ℃液氮冻存。3个月后细胞复苏, 倒置显微镜观察细胞形态, 细胞计数试剂盒（CCK-8）绘制生长曲线, 流式细胞仪检测干细胞标志CD45、CD90、CD105表达, 体外经成骨成脂及成肌等多向诱导分化。比较两组犬ADSC上述生物学特性指标差异, 组间均数比较采用t检验, 细胞生长曲线分析采用重复测量方差分析。结果犬ADSC原代培养4～5 d便可达95%细胞融合, 细胞贴壁生长, 呈长梭形。与非冻存组比较, 冻存组犬ADSC形态相似, CCK-8检测两组细胞增殖能力差异无统计意义（F=1.233, P＆0.05）;冻存组犬ADSC表面标志CD45、CD90、CD105表达分别为（1.53±0.11）%、（97.52±1.61）%和（96.86±1.88）%, 非冻存组犬ADSC表面标志CD45、CD90、CD105表达分别为（1.44±0.12）%、（96.31±1.76）%和（97.90±1.25）%, 组间比较差异无统计意义（tCD45=0.958, tCD90=0.877, tCD105=0.798, 均P＆0.05）。与非冻存组比较, 冻存组犬ADSC同样具有强大的多向分化能力, 包括成肌、成脂和成骨分化。结论冻存后犬ADSC一般生物学特性及多向分化潜能无明显改变, 能作为犬ADSC长期储存和运输的保存条件。