长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1靶向微小RNA-16抑制骨髓间充质干细胞的成骨分化

摘要

目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1（lncRNA SNHG1）靶向微小RNA-16（miR-16）对人骨髓间充质干细胞（BMSCs）成骨分化的影响。方法将BMSCs（购自上海泽叶生物科技有限公司）进行体外培养, 实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测BMSCs成骨诱导前后SNHG1和miR-16的表达水平。将BMSCs分为正常组、诱导分化组、si-con组、si-SNHG1组、miR-con组、miR-16组、si-SNHG1+anti-miR-con组和si-SNHG1+anti-miR-16组。蛋白质印记（Western blot）检测碱性磷酸酶（ALP）、Runt相关转录因子2（Runx2）、骨桥蛋白（OPN）的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证SNHG1和miR-16的靶向调控关系。两组间数据比较采用独立样本t检验, 多组间数据比较采用单因素方差分析和LSD-t检验。结果与正常组比较, 诱导分化组BMSCs细胞SNHG1（0.64±0.12比1.00±0.08, t=1.323, P＆0.05）的表达水平显著降低, miR-16（4.54±0.84比1.00±0.11, t=7.238, P＆0.01）的表达水平显著升高。与si-con组比较, si-SNHG1组BMSCs中ALP（0.61±0.06比0.41±0.05, t=4.435, P＆0.05）、Runx2（1.25±0.13比0.79±0.09, t=5.039, P＆0.01）、OPN（0.94±0.08比0.41±0.06, t=9.180, P＆0.01）蛋白表达显著升高。与miR-con组比较, miR-16组BMSCs中ALP（0.63±0.06比0.40±0.04, t=5.524, P＆0.01）、Runx2（1.04±0.09比0.69±0.07, t=5.317, P＆0.01）、OPN（0.98±0.11比0.51±0.08, t=5.985, P＆0.01）蛋白表达显著升高。与si-SNHG1+anti-miR-con组比较, si-SNHG1+anti-miR-16组BMSCs中ALP（0.52±0.04比0.66±0.06, t=3.363, P＆0.05）、Runx2（0.89±0.07比1.08±0.09, t=2.886, P＆0.05）、OPN（0.71±0.08比0.98±0.11, t=3.438, P＆0.05）蛋白表达显著降低。miR-16是SNHG1的靶基因, SNHG1可负性调控miR-16表达。结论 lncRNA SNHG1通过靶向miR-16可抑制BMSCs成骨分化。