低氧微环境促进聚3羟基丁酸酯-co-4羟基丁酸酯与小鼠骨髓间充质干细胞三维培养形成心肌补片的研究

摘要

目的 观察低氧微环境对小鼠骨髓间充质干细胞(mMSCs)与聚3羟基丁酸酯-co-4羟基丁酸酯[P(3HB-co-4HB)]三维培养形成心肌补片的影响.方法 提取mMSCs,将5代mMSCs与P(3HB-co-4HB)三维培养制作成细胞补片,随机分为常氧组和低氧组,用细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定细胞增殖;扫描电子显微镜(SEM)观察补片存活、黏附、生长.加入诱导剂5氮杂胞苷,免疫荧光检测两组心肌肌钙蛋白T (cTnT)的表达;通过实时定量聚合酶链反应(PCR)检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA的表达,用蛋白质印迹法(Western blot)检测两组HIF-1α蛋白的表达.采用独立样本均数t检验进行统计学分析.结果 CCK-8法测定低氧组吸光度(A)值(0.349±0.038)显著大于常氧组(0.308±0.025)(t=2.420,P＜0.05),SEM观察到低氧组P(3HB-co-4HB)材料上细胞数量更多,细胞形态正常,黏附牢固.免疫荧光显示低氧组cTnT表达比常氧组更加显著;实时定量PCR观察到低氧组的HIF-1 mRNA表达水平上调(P＜0.05);Western blot检测HIF-1α蛋白相对表达水平低氧组(0.63±0.06)显著高于常氧组(0.47±0.05) (P＜0.05).结论 低氧微环境可促进mMSCs在P(3HB-co-4HB)上的黏附、存活、增殖、分化,并且形成一种更有效的心肌补片,这一效应可能与HIF-1α通路的激活有关.