β-分泌酶反义RNA通过微小RNA-137调控血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞损伤

摘要

目的探讨β-分泌酶反义核糖核酸（BACE1-AS）对血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）诱导的心肌细胞损伤的影响及其机制。方法 Ang Ⅱ处理H9c2心肌细胞（购自中国科学院上海细胞库）建立心肌细胞损伤模型,H9c2心肌细胞培养液中加入Ang Ⅱ建立心肌细胞损伤模型（Ang Ⅱ组）,同时将正常培养的心肌细胞作为对照（Con组）。分别将干扰对照序列（si-NC）、干扰BACE1-AS序列（si-BACE1-AS）、抑制剂阴性对照序列（anti-miR-NC）、Ang Ⅱ+si-BACE1-AS与miR-137抑制剂（anti-miR-137）转染至心肌细胞,加入含有浓度为1 μmol/L Ang Ⅱ的培养液继续培养48 h,分别记作Ang Ⅱ+si-NC、Ang Ⅱ+si-BACE1-AS、Ang Ⅱ+si-BACE1-AS+anti-miR-NC、Ang Ⅱ+si-BACE1-AS+anti-miR-137组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测BACE1-AS、微小RNA-137（miR-137）的表达水平;检测乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）含量;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测BACE1-AS和miR-137的靶向关系;蛋白质印迹法（Western blot）检测B淋巴细胞瘤-2（bcl-2）和bcl-2相关X蛋白（bax）表达。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。结果与Ang Ⅱ+si-NC组比较,Ang Ⅱ+si-BACE1-AS组凋亡率显著降低[（14.83±2.28）%比（27.84±1.54）%,t=28.137,P＆0.05],bax蛋白水平显著降低（0.64±0.10比0.97±0.02,t=40.627,P＆0.05）,bcl-2蛋白水平显著升高（0.68±0.05比0.33±0.04,t=19.032,P＆0.05）,差异均有统计学意义。双荧光素酶报告实验证实BACE1-AS可靶向结合miR-137。Ang Ⅱ+si-BACE1-AS+anti-miR-137组miR-137、SOD和bcl-2水平低于Ang Ⅱ+si-BACE1-AS+anti-miR-NC组（0.36±0.11比0.99±0.01、21.18±1.66比32.85±2.98、0.38±0.08比0.68±0.04,t=17.111、10.263、10.062,P＆0.05）,LDH、MDA、凋亡率和bax水平高于Ang Ⅱ+si-BACE1-AS+anti-miR-NC组（377.03±2.75比323.52±20.71、30.80±2.56比18.06±0.58、23.04±2.55比14.80±0.35、0.88±0.04比0.63±0.05,t=7.684、14.561、9.604、11.713,P＆0.05）,差异均有统计学意义。结论敲低BACE1-AS表达可通过上调miR-137的表达来减轻Ang Ⅱ诱导的心肌细胞损伤。