核不均一核糖核蛋白C对胶质瘤侵袭、迁移的作用及其机制

摘要

目的检测胶质瘤组织中核不均一核糖核蛋白C（hnRNPC）表达, 探讨hnRNPC对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响。方法分别采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）及蛋白质印迹法（Western blot）检测西南医科大学附属医院神经外科2017年1月至2018年12月经病理证实为胶质瘤组织标本hnRNPC mRNA和蛋白表达, 采用小干扰RNA及慢病毒转染U87细胞, 干扰U87细胞hnRNPC的表达并检测干扰效率, Transwell侵袭实验及划痕实验检测侵袭和迁移能力的改变, Western blot检测各组细胞磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、磷酸化（p）-PI3K、蛋白激酶B（Akt）、p-Akt蛋白表达;在稳定干扰hnRNPC的基础上使用胰岛素样生长因子（IGF）-1激活PI3K/Akt信号通路并检测U87细胞侵袭和迁移能力的变化。两组之间比较采用t检验, 多组间比较采用单因素方差分析（SNK-q检验）。结果胶质瘤组织中hnRNPC表达为正常脑组织的（4.482±0.760）倍, 差异有统计学意义（t=-2.893, P＆0.05）;稳定敲减hnRNPC后, Western blot检测实验组（sh-hnRNPC-1、sh-hnRNPC-2）较对照组（sh-Con）及空白组蛋白（Blank）表达分别下降（2.512±0.684）倍和（2.516±1.795）倍, 差异有统计学意义（F=81.256、70.863, P＆0.05）, 实验组（sh-hnRNPC）细胞迁移面积[（8.373±0.104）%]相对于对照组（sh-Con）细胞迁移面积[（16.610±0.440）%]和空白组（Blank）迁移面积[（17.867±0.570）%]明显减小, 差异有统计学意义（F=452.083, P＆0.05）, 实验组（sh-hnRNPC）穿过Transwell小室基底膜的细胞数目为（122.000±12.530）个, 较对照组（sh-Con）细胞数目[（359.000±34.771）个]和空白组（Blank）细胞数目[（375.000±14.503）个]明显减少, 差异有统计学意义（F=114.944, P＆0.05）, 与瞬时敲减hnRNPC后结果一致。敲减hnRNPC后, 各组细胞中PI3K、Akt表达无变化, 差异无统计学意义（F=0.388、2.590, P＆0.05）, 实验组（si-hnRNPC）p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显下调, 分别降低了（2.060±1.046）倍和（3.087±0.514）倍, 差异有统计学意义（F=89.393、255.863, P＆0.05）。稳定干扰hnRNPC, 再加入IGF-1激活PI3K/Akt信号通路后, 能逆转U87细胞侵袭和迁移能力。结论 hnRNPC在胶质瘤组织的表达与胶质瘤病理级别呈正相关, 胶质瘤病理级别越高, hnRNPC表达越高, 提示hnRNPC可能参与胶质瘤的恶性发展;hnRNPC可通过PI3K/Akt信号通路调控胶质瘤细胞侵袭和迁移。