补体免疫抑制剂-免疫球蛋白超家族补体受体的原核表达与纯化

摘要

目的 构建免疫球蛋白超家族补体受体（CRIg）的原核表达质粒pSmartⅠ-SUMO-CRIg,并通过大肠杆菌表达体系对其进行表达和纯化,并检测表达产物活性。方法 从人肝脏细胞HHMa中提取总RNA,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和DNA无缝克隆技术,将编码人CRIg胞外段基因序列克隆至pSmart-Ⅰ载体上,选择阳性菌落进行质粒提取和测序,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹法（Western blot）对其表达产物进行检测,预测SDS-PAGE检测结果位于40 000处。最后通过补体旁路途径溶血实验检测其活性。重复3次实验取算术平均值绘制溶血曲线。结果 扩增出的人CRIg片段长度为819 bp,测序结果比对为人CRIg胞外段序列,提取质粒转化至Rosetta菌株后通过IPTG诱导发现CRIg可以稳定在上清中表达。溶血实验证明25 μm蛋白浓度可以几乎完全抑制溶血。结论 CRIg可以在原核表达体系中实现可溶性表达。