Rnd3通过对p65的泛素化调节诱导胶质瘤细胞凋亡

摘要

目的 探讨Rnd3在胶质瘤细胞凋亡中的作用及机制。方法 通过Myc-Rnd3真核表达质粒转染,以Myc真核表达质粒转染作为对照,调控胶质瘤细胞株U251中Rnd3的表达；采用流式细胞术检测转染后U251细胞凋亡率；用Western blot技术检测细胞内Rnd3、p65、B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）以及裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（cleaved-Caspase-3）的表达；以Flag真核表达质粒转染作为对照,通过Flag-p65真核表达质粒转染恢复p65表达后,用Western blot技术检测其下游bcl-2以及cleaved-Caspase-3蛋白的表达；Myc-Rnd3转染后,用MG-132抑制蛋白泛素化,检测细胞内p65蛋白表达。结果 经真核表达质粒转染后,Myc-Rnd3组细胞Rnd3蛋白表达量较Myc组显著提高（P＆0.05）；Myc-Rnd3组细胞凋亡由U251-Myc组7.28%（5.36±0.1、1.92±0.12）增加至U251-Myc-Rnd3组的19.93%（13.51±0.32、6.42±0.21）,细胞凋亡率明显高于Myc组,差异有统计学意义（P＆0.05）；与U251-Myc组比较,U251-Myc-Rnd3组p65蛋白表达量降低,高表达的Rnd3使p65表达下调,进而引起bcl-2下调和cleaved-Caspase-3上调,差异有统计学意义（P＆0.05）；逆转p65蛋白功能后（p65＋,Rnd3－）组较（p65－,Rnd3－）组p65表达量升高（P＆0.05）,bcl-2表达量升高（P＆0.05）,cleaved-Caspase-3表达量降低（P＆0.05）；（p65＋,Rnd3＋）组较（p65＋,Rnd3－）组p65表达量差异无统计学意义；（p65－,Rnd3＋）组较（p65－,Rnd3－）Rnd3表达量升高（P＆0.05）,p65表达量降低（P＆0.05）,bcl-2表达量降低（P＆0.05）,cleaved-Caspase-3表达量升高（P＆0.05）；MG-132抑制细胞内蛋白泛素化途径结果显示,随着Rnd3蛋白表达量升高,p65蛋白表达量依次降低；而在MG-132处理组,随着Rnd3蛋白表达量升高,p65蛋白表达量差异无统计学意义。结论 Rnd3可能通过促进p65泛素化诱导U251胶质瘤细胞凋亡。