甲状旁腺激素基因治疗甲状旁腺功能低下症

摘要

目的观察甲状旁腺激素（PTH）基因和蛋白体外表达情况,并评价其基因治疗甲状旁腺功能低下模型鼠的作用。方法（1）以脂质体将质粒pcDPG分别1次和多次转染293细胞,观察绿色荧光蛋白（GFP）的表达并计算转染率;（2）转染24、48、72和96h后real-ti me定量PCR和Western blot法检测PTH基因与蛋白表达,并活性鉴定;（3）建立甲状旁腺功能低下症模型,将pcDPG质粒多次肌肉注射治疗,监测血钙和PTH值、存活时间及各器官病理变化。结果转染后24h即见GFP表达,72h达高峰,96h开始减少;多次转染后GFP表达率可达90%以上;PTHcD-NA拷贝数转染24h为5×103,72h达最高为8×104,多次转染显著增高（P＜0.01）;Western blot见48h和72h有PTH蛋白表达,其可对抗甲状旁腺切除小鼠抽搐症状;术后第2天血钙与PTH明显低于术前（P＜0.05）,pcDPG质粒大、中剂量组连续治疗48h后血钙与PTH值均恢复正常。结论重组PTH基因治疗甲状旁腺功能低下模型鼠有较好的疗效。