肾癌G250启动子及肿瘤细胞p53突变双重调控的表达Ki67-siRNA的增殖腺病毒的构建

摘要

目的构建一种受肾癌G250启动子及肿瘤细胞p53突变双重调控的表达Ki67基因小干扰RNA（Ki67-E1B 55kDsiRNA）的新型增殖腺病毒。方法将含有H1启动子的Ki67-siRNA表达框插入E1B 55kD缺失增殖腺病毒载体pZD55中,构建pZD55-Ki67质粒。用G250启动子取代pZD55-Ki67的E1A启动子,构建双调控增殖腺病毒载体pZD-G250-Ki67。将pZD-G250-Ki67与腺病毒右臂质粒pBHGE3共转染293细胞,9～12d后出现病毒空斑。提取重组腺病毒的DNA、聚合酶链反应（PCR）鉴定正确者即为条件增殖腺病毒ZD-G250-Ki67。鉴定、扩增、纯化、测病毒滴度。结果成功构建G250启动子调控E1B 55kD蛋白编码基因缺失的表达Ki67-siRNA的双调控增殖型腺病毒ZD-G250-Ki67。病毒滴度为2×1011 PFU/ml。结论成功构建的ZD-G250-Ki67为利用Ki67-siRNA靶向肾癌治疗奠定基础。