鞘氨醇激酶1表达下调对肿瘤Hela细胞增殖和细胞凋亡的影响及其机制

摘要

目的观察鞘氨醇激酶1（SphK1）表达下调对肿瘤Hela细胞增殖和细胞凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法将SphK1 siRNA和对照siRNA转染肿瘤Hela细胞,转染后将细胞分为3组:未转染组、siRNA对照组和SphK1 siRNA组。应用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和Western blot技术检测转染SphK1 siRNA后SphK1 mRNA和蛋白的表达。采用细胞计数试剂盒（CCK-8）和流式细胞术分别检测3组细胞增殖和细胞凋亡的变化。进一步利用Western blot技术检测与细胞增殖和细胞凋亡密切相关蛋白的表达。结果 SphK1 siRNA组中SphK1 mRNA和蛋白的相对表达水平（分别为0.153±0.037和0.123±0.037）,显著低于未转染组（分别为1.000±0.000和0.688±0.049）和siRNA对照组（分别为0.932±0.039和0.673±0.057）（P＜0.05）。细胞增殖结果表明,与未转染组和siRNA对照组比较,SphK1 siRNA组中Hela细胞的增殖明显受到抑制（P＜0.05）。流式细胞结果表明,SphK1 siRNA组中Hela细胞早期凋亡细胞数比率为（23.85±0.72）%,显著高于未转染组（11.67±1.02）%和siRNA对照组（11.85±0.71）%,差异有统计学意义（F=211.451,P＜0.05）。Western blot检测结果表明,SphK1 siRNA组中p21、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）和Caspase-9蛋白的相对表达水平（分别为0.381±0.025、0.406±0.041和0.374±0.035）,显著高于未转染组（分别为0.127±0.039、0.064±0.023和0.115±0.039）和siRNA对照组（分别为0.125±0.034、0.060±0.018和0.126±0.038）（P＜0.05）。结论 SphK1可能与宫颈癌的发生发展密切相关,其表达下调介导的增殖抑制和细胞凋亡可能与p21、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达的上调密切相关。