信号转导和转录激活因子3信号通路在多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1诱导U251细胞凋亡中的作用

摘要

目的探讨信号转导和转录激活因子3（STAT3）信号通路在多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1（LRIG1）诱导人脑胶质瘤细胞株U251细胞凋亡中的作用及机制。方法传代培养U251细胞,随机分为对照组、空载体组及实验组,应用脂质体介导的基因转染技术分别将磷酸盐缓冲液（PBS）、PEGFP-N1质粒体、PEGFP-LRIG1质粒体转染入各组细胞,应用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞体外生长活性,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）/碘化丙锭（PI）法经流式检测各组细胞凋亡率,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定各组细胞中STAT3的mRNA表达,Westernblot法测定各组细胞中STAT3、磷酸化STAT3（p-STAT3）、B淋巴细胞/白血病-2（bcl-2）、bax的蛋白表达。结果成功转染LRIG1,实验组细胞中LRIG1基因表达明显上调（P＜0.05）;实验组细胞增殖显著受抑,48 h抑制率为（45.12±0.68）%,72 h抑制率为（52.24±1.77）%,总凋亡率由（2.54±0.43）%增高至（22.51±2.12）%（P＜0.05）;RT-PCR检测显示实验组细胞中STAT3 mRNA表达明显降低;Western blot检测显示实验组细胞中STAT3蛋白表达及磷酸化水平明显降低,bcl-2表达明显降低,bax表达明显升高。结论 LRIG1可促进U251细胞凋亡,其机制可能是通过下调STAT3信号通路,进而抑制STAT3激活的抗凋亡途径。