抑制葡萄糖调节蛋白78和葡萄糖调节蛋白94表达对胃癌细胞株生长的影响

摘要

目的观察利用psiSTRIKETM/葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和psiSTRIKETM/GRP94抑制人类胃癌细胞株SGC-7901 GRP78和GRP94基因表达对胃癌细胞活性及凋亡的影响。方法构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子U6的真核表达载体,采用LipofectamineTM 2000转染试剂进行共转染,将psiSTRIKETM/GRP78和psiSTRIKETM/GRP94同时导入胃癌细胞内,在转染前及转染后72 h通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、间接法免疫荧光技术检测GRP78和GRP94mmRNA及蛋白水平的表达,并设立阴性对照组（只加入转染试剂）比较。设立3组:实验组（共转染组）、阴性对照组（只加入转染试剂）及空白对照组（未加任何处理）,在转染72 h后用噻唑蓝（MTT）法检测胃癌细胞活性,流式细胞仪检测胃癌细胞早期凋亡。结果成功将psiSTRIKETM/GRP78和psiSTRIKETM/GRP94转染至SGC-7901 72 h后,与2个对照组比较,GRP78相对表达量为0.49,GRP94为0.40,与对照组比较的表达明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）。MTT结果显示:在转染后48 h及72 h,与2个对照组比较,实验组胃癌细胞生长受到抑制;转染后72 h,实验组具有21.98%的凋亡率,与空白对照组和阴性对照组比较细胞凋亡显著增多,而阴性对照组（6.04%）与空白对照组（1.05%）比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论在体外同时转染psiSTRIKETM/GRP78和psiSTRIKETM/GRP94 72 h后,胃癌细胞株SGC-7901 GRP78及GRP94表达明显降低。转染72 h后胃癌细胞活性明显受到抑制,细胞早期凋亡增多。