慢病毒介导小干扰RNA沉默人结肠癌HT-29细胞芳香烃受体核转位蛋白基因的研究

摘要

目的获取有效沉默人结肠癌HT29细胞的芳香烃受体核转位蛋白基因（ARNT）的短发卡RNA（shRNA）重组慢病毒。方法构建4组表达ARNT-shRNA的慢病毒载体和1组无效干扰慢病毒载体并测序鉴定。用合成的5组重组慢病毒转染HT29细胞,通过克隆稀释扩大培养获取5组稳定转染细胞株,实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）和Western blot检测沉默效率。结果成功构建4组表达ARNT-shRNA的重组慢病毒,其中1组（LV-ARNT-RN Ai-3）转染HT29细胞后能有效沉默ARNT基因,mRNA相对表达下降70%（P＜0.05）,蛋白水平表达下降60%（P＜0.05）。结论重组慢病毒LV-ARNT-RNAi-3可以下调人结肠癌HT29细胞ARNT基因的表达。