腺病毒介导的骨形态发生蛋白-2和骨形态发生蛋白-7基因联合转染大鼠脂肪来源干细胞对成骨分化的影响

摘要

目的观察腺病毒介导的骨形态发生蛋白-2（BMP-2）和骨形态发生蛋白-7（BMP-7）基因联合转染对大鼠脂肪来源干细胞成骨分化的影响。方法分别构建携带绿色荧光蛋白的BMP-2重组腺病毒表达质粒及携带红色荧光蛋白的BMP-7的重组腺病毒表达质粒,包装、生产携带BMP-2和BMP-7的腺病毒。分离并培养大鼠脂肪来源干细胞（ADSCs）,分别以Ad-BMP-2转染ADSCs、Ad-BMP-7转染ADSCs和Ad-BMP-2、Ad-BMP-7共转染ADSCs,另设未转染ADSCs作为对照。转染后在荧光显微镜下观察4组细胞中重组蛋白的表达。应用Western blot检测转染后14 d4组细胞骨钙素（OCN）和Ⅰ型胶原的蛋白表达,并检测各组碱性磷酸酶（ALP）的活性。结果荧光显微镜下观察BMP-2和BMP-7可以高效稳定表达,骨钙素（OCN）和Ⅰ型胶原的表达明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）,并且联合转染组最高。Ad-BMP-2及Ad-BMP-7转染细胞的ALP活性升高,联合转染组的ALP活性明显高于其他组,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论腺病毒介导BMP-2和BMP-7基因共转染可促进ADSCs向成骨方向分化。