鼠白细胞介素-33真核质粒的构建及其在GL261中的稳定表达

摘要

目的构建鼠白细胞介素-33（IL-33）真核表达质粒,建立并检测稳定表达IL-33的细胞株GL261。方法从Genebank找出鼠IL-33基因全长序列（801 bp）,人工合成、装载于表达载体pEZ-M03,扩增后酶切鉴定。将鉴定正确的质粒转染的小鼠胶质瘤细胞GL261,并用浓度为200 mg/L的G418筛选出阳性克隆,采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测目的基因表达量;Western blot法检测目的蛋白的表达量,并观察转染后的GL261细胞体外生长状况。结果成功构建鼠IL-33真核质粒pEZ-M03-mIL33,经过浓度为20mg/L的G418工作液筛选出了稳定高表达鼠IL-33的细胞株GL261,且其生长状态未受到转染基因的影响（P＞0.05）。Real-time PCR检测目的基因在瞬转、稳转细胞株中皆为高表达（P＜0.01）。Western blot检测到稳转细胞株中目的蛋白明显高表达（P＜0.01）。结论本研究构建的鼠IL-33真核质粒能于GL261中获得稳定高表达。