pIRES2-EGFP-hBMP-2真核表达载体的构建及鉴定

摘要

目的构建带有报告基因增强绿色荧光蛋白（EGFP）的人骨形态发生蛋白-2（hBMP-2）真核表达载体。方法通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法从人外周血淋巴细胞中扩增出骨形态发生蛋白-2（BMP-2）基因,构建BMP-2基因和报告基因EGFP真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP-2,经PCR、酶切、测序等方法进行鉴定,紫外分光光度计测定质粒浓度及纯度。结果真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP-2酶切后显示空载体和hBMP-2基因片段长度分别为5.3 kb和366 bp,PCR扩增hBMP-2基因片段长度366 bp,紫外分光光度计测定空载体和含hBMP-2基因的质粒浓度分别为382 mg/L和383 mg/L,测序证实plRES2-EGFP-hBMP-2载体序列正确。结论成功构建真核表达载体plRES2-EGFP-hBMP-2,可为后续骨修复的基因治疗研究奠定基础。