去乙酰化酶Sirt3沉默对缺氧条件下肠上皮Caco-2细胞缺氧诱导因子-1α表达的影响及其对肠上皮屏障功能的作用

摘要

目的采用RNA干扰（RNAi）技术,使去乙酰化酶Sirt3基因表达下调或缺失,观察其下调或缺失后对缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的影响及其对肠屏障功能的作用。方法体外培养Caco-2细胞,分别检测跨上皮电阻（TER）,常氧和低氧（1%O2）条件下Sirt3-小干扰RNA（siRNA）转染前后HIF-lo和紧密连接蛋白:ZO-1、Occludin、Claudin-1的mRNA与蛋白表达。结果常氧与低氧条件下,Sirt3-siRNA转染后Sirt3的蛋白表达分别下降52%、35%;HIF-1α的蛋白表达（0.72--0.01、0.93±0.01）比转染前（0.38±0.01、0.81±0.03）明显升高（P＜0.01）;低氧条件下,Sirt3-siRNA转染后Occludin、Claudin-1、ZO-1的蛋白（0.71±0.03、0.69±0.01、0.72±0.02）和mRNA（0.80±0.01、0.84±0.01、0.88+0.03）表达比转染前明显降低（P＜0.01）;低氧条件下,经Sirt3-siRNA转染后TER下降30.8%。结论缺氧条件下,Sirt3可以调控HIF-1α的表达。沉默Sirt3后紧密连接蛋白表达降低,从而影响肠屏障功能。