甲基硫代腺苷对正常结肠NCM460细胞和结肠癌HCT116细胞增殖的影响及其机制

摘要

目的探讨甲基硫代腺苷（MTA）对正常结肠NCM460细胞和结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用噻唑蓝（MTT）比色技术、Hoechst33258染色技术检测MTA对NCM460和HCT116细胞增殖和凋亡的影响.Westren blot检测MTA对HCT116细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、bcl-2相关X蛋白（bax）、bcl-2同源拮抗剂（bak）、bcl-xL等表达的影响。结果 （1）对增殖的影响:MTA 0.5、1.0、2.0、3.0 mmol/L作用16 h后, NCM460细胞存活率分别为（98.9±3.3）%、（94.5±2.8）%、（88.4±2.5）%、（81.3±2.1）%。MTA 0.5、1.0、2.0、3.0 mmol/L作用16 h后, HCT116细胞存活率分别为（84.1±4.5）%、（69.4±5.2）%、（55.3±3.8）%、（40.9±3.5）%, 两组间差异有统计学意义（P＆0.05）。（2）对凋亡的影响:MTA 0、0.5、1.0、2.0、3.0 mmol/L作用16 h后, NCM460细胞凋亡率分别为（3.5±0.3）%、（4.6±0.6）%、（7.2±1.1）%、（9.8±1.6）%、（12.4±1.2）%。MTA 0、0.5、1.0、2.0、3.0 mmol/L作用16 h后, HCT116细胞凋亡率分别为HCT116细胞凋亡率分别为（3.3±0.7）%、（11.0±1.4）%、（20.3±3.0）%、（30.1±4.1）%、（39.3±4.4）%, 两组间差异有统计学意义（P＆0.05）。（3）MTA处理的NCM460细胞生长密集, 光泽度好, 未见明显凋亡。MTA处理HCT116细胞, 尤其是2 d处理组, 出现明显细胞凋亡。（4）Western blot:MTA作用HCT116细胞中MTA受体MTA1AR的表达上调, 与NCM460细胞的MTA1AR表达比较, 差异有统计学意义（P＆0.05）。（5）MTA作用于HCT116后, 抑制凋亡的bcl-2和bcl-xL的表达明显下降, 而促进凋亡的bax、bak等表达, 与凋亡密切相关的指标bcl-2/bax比值明显下降。结论 MTA对HCT116细胞有明显的抗肿瘤活性, 对NCM460细胞的毒性较低。MTA发挥作用与其受体蛋白MTA1AR的上调有关, 并且凋亡相关蛋白的表达发生变化。提示MTA通过促进细胞凋亡来抑制细胞增殖。