自身免疫性肝炎肝脏叉状头/翅膀状螺旋转录因子基因甲基化调控调节性T细胞增殖和功能

摘要

目的观察恒河猴轮状病毒（RRV）对BAL-B/c小鼠肝脏内调节性T（Treg）细胞的抑制作用是否与Treg细胞叉状头/翅膀状螺旋转录因子（Foxp3）基因启动子CpG岛甲基化有关,探讨其在小鼠肝脏自身免疫炎症中的作用。方法 60只7~9周龄BALB/c小鼠随机分为3组（每组20只）腹腔注射空斑形成单位（PFU）=106RRV感染24 h和48 h,正常对照组腹腔注射相同容积生理盐水,Percoll非连续梯度分离单核细胞,利用流式细胞仪分选小鼠肝脏CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞。应用重亚硫酸盐修饰后测序法（1BSP）检测BALB/c小鼠脾脏组织中分选出的Treg细胞DNA Foxp3基因启动子CpG岛甲基化状态,Western blot检测Foxp3蛋白的表达。结果 Treg细胞在正常对照组和RRV24、48 h占CD4+细胞比例分别为（5.26±0.21）%、（4.30±0.46）%、（3.60±0.19）%,RRV 24、48 h的比例与正常对照组细胞比例差异有统计学意义（P＜0.05）;对照组和RRV组24、48 hCpG岛甲基化程度分别为（2.78±0.33）%、（26.70±1.87）%、（41.18±3.67）%,各时间点甲基化率均较正常组明显升高（P＜0.01）,Treg细胞Foxp3蛋白表达也明显下降,与RRV感染的时间呈正相关,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 RRV可以明显促进BALB/c小鼠肝脏中Treg细胞Foxp3基因启动子CpG岛甲基化抑制Treg细胞的增殖和正常的免疫功能,这一过程可能参与了小鼠自身免疫性肝炎的发生。