信号传导与转录激活因子3信号传导通路对结肠癌细胞G1～S期的调控

摘要

目的 探讨信号传导与转录激活因子3(STAT3)信号传导通路对结肠癌细胞G1～S期调控的机制.方法 将人结肠癌细胞SW480与HCT116培养于含有10％的胎牛血清的RPMI1640培养基中,应用阳离子脂质体介导STAT3反义寡核苷酸转染人结肠癌SW480与HCT116细胞,阻断其STAT3通路;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖状态;流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测STAT3、磷酸化STAT3、G1期细胞周期蛋白(Cyclin)、周期蛋白依赖性激酶(CDK)、p21、p27的表达.应用SPSS 18.0统计软件分析.结果(1)SW480细胞转染STAT3反义寡核苷酸后,细胞增殖水平下降,而相应空白对照组、转染正义寡核苷酸组及错配寡核苷酸组变化不明显.STAT3反义寡核苷酸作用于SW480细胞72 h后,G期细胞比率由74.2％上升至90.8％,S期细胞比率由21.0％下降至7.4％,细胞增殖受抑制.STAT3蛋白表达与激酶活性明显下调.(2)HCT116细胞转染STAT3反义寡核苷酸后,细胞增殖水平下降,而空白对照组、转染正义寡核苷酸组及错配寡核苷酸组变化不明显.STAT3反义寡核苷酸作用于HCT116细胞72 h后,G期细胞比率由68.9％上升至85.6％,S期细胞比率由15.4％下降至7.6％,细胞增殖受抑制.STAT3蛋白表达与激酶活性下调.(3)STAT3信号传导通路对结肠癌细胞G1～S期Cyclin与CDK的调节作用:转染STAT3反义寡核苷酸72 h后,SW480细胞和HCT116细胞的细胞周期素Cyclin D1、Cyclin E与细胞周期素依赖性激酶CDK2、CDK4、CDK6都出现不同程度的下调.(4)STAT3信号传导通路对细胞周期素依赖性激酶抑制因子(CKI)的调节作用:转染STAT3反义寡核苷酸72 h后,SW480细胞和HCT116细胞的细胞周期素依赖性激酶抑制因子p21、p27的蛋白表达升高.结论STAT3信号传导通路可能通过调节CDK/Cyclin复合物与CKI成员之间的平衡而调节结肠癌细胞G1～S期转换.