微小RNA-99a靶向作用哺乳动物雷帕霉素靶蛋白对乳腺癌细胞生长和迁移的影响

摘要

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-99a作用于靶蛋白哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)对乳腺癌细胞生长和迁移的影响.方法 构建miR-99a转染乳腺癌细胞、miR-99a和mTORcDNA共同转染乳腺癌细胞模型,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测乳腺癌组织及癌旁组织中miR-99a和mTOR mRNA的表达,Western blot检测乳腺癌组织中及细胞中mTOR蛋白水平,分析乳腺癌组织中miR-99a与mTOR表达的相关性.流式细胞术检测细胞周期.膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)测定细胞凋亡水平.Transwell实验检测细胞迁移水平.结果 乳腺癌组织中miR-99a的相对表达量为0.31土0.08显著低于癌旁正常组织(P＜0.05).mTOR蛋白在正常组织相对表达量为0.51±0.07,癌组织中其相对表达量为1.03±0.11,mTOR蛋白在乳腺癌组织中表达量显著升高(P＜0.05).乳腺癌组织中miR-99a的表达量与mTOR蛋白表达呈负相关.与正常对照组比较,miR-99a模拟物转染组乳腺癌细胞中mTOR蛋白表达水平显著下降,mRNA相对表达量为0.42±0.06显著低于正常对照组(P＜0.01).miR-99a模拟物转染组乳腺癌细胞处于G0/G1比率为(20.05±1.23)％显著高于正常对照组的(2.85±0.76)％(P＜0.01).miR-99a模拟物转染组乳腺癌细胞凋亡率为(24.66±2.14)％显著高于正常对照组[(4.81±3.37)％,P＜0.01],且细胞迁移数为(27±4)个显著低于正常对照组细胞的(124±18)个(P＜0.01).结论miR-99a可通过靶向作用于mTOR蛋白以抑制乳腺癌细胞的生长和迁移,其机制与调节细胞周期、促进细胞凋亡、抑制细胞迁移有关.