非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶-11通过低氧诱导因子-1α调控破骨细胞分泌和骨吸收

摘要

目的探讨人破骨细胞中非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶11（PTPN11）的表达及其作用机制。方法收集不同年龄组健康志愿者（青年组28例:20~45岁;中年组33例:46~60岁;老年组31例:61~80岁）外周血单个核细胞,诱导成破骨细胞。将细胞分为对照组、空白组、Adv-PTPN11转染组。利用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测PTPN11、低氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA的表达,利用Western blot检测PTPN11、HIF-1α蛋白的表达,噻唑蓝（MTT）法测定细胞存活,利用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定基质细胞衍生因子-1（SDF-1）、白细胞介素（IL）-6、巨噬细胞炎性蛋白-1α（MIP-1α）、B细胞激活因子（BAFF）分泌量,同时检测骨吸收。结果与青年组（mRNA:4.468±1.441,蛋白:1.000±0.055）和中年组（mRNA:4.673±1.469,蛋白:1.021±0.076）比较,老年组破骨细胞中PTPN11 mRNA（7.510±1.941）和蛋白（1.556±0.123）表达明显上升。破骨细胞转染Adv-PTPN11后24、48、72 h存活率比较差异无统计学意义。Adv-PTPN11转染组HIF-1αmRNA和蛋白的表达量明显高于对照组和空白组。Adv-PTPN11转染组SDF-1[（94.2±10.3）ng/ml]、IL-6[（25.1±3.2）ng/ml]、MIP-1α[（31.2±3.9）ng/ml]、BAFF[（39.8±3.7）ng/ml]表达量增高,同时骨陷窝数量和面积也增加。HIF-1α抑制剂YC-1处理则抑制破骨细胞中SDF-1[（73.8±7.5）ng/ml]、IL-6[（17.9±2.5）ng/ml]、MIP-1α[（19.8±1.6）ng/ml]、BAFF[（23.5±2.7）ng/ml]表达及骨吸收。结论 PTPN11可通过HIF-1α影响破骨细胞细胞因子表达和骨吸收。