内皮祖细胞血管化大鼠肝脏脱细胞支架的研究

摘要

目的制备大鼠肝脏脱细胞支架及原代培养大鼠骨髓源性内皮祖细胞,用内皮祖细胞血管化大鼠肝脏脱细胞支架。方法采用灌注法制备大鼠肝脏脱细胞支架,苏木素-伊红（HE）染色法、免疫组织化学检测脱细胞支架结构及成分;原代培养并鉴定大鼠骨髓源性内皮祖细胞,并通过CD31、CD133、血管内皮生长因子（VEGF）免疫荧光鉴定;构建循环灌注培养体系;采用经门静脉途径将内皮祖细胞种植于脱细胞支架内,行体外循环灌注培养,通过HE和CD31检测内皮祖细胞在支架内生长情况。结果采用灌注法获得大鼠肝脏脱细胞支架,HE未见细胞核成分,同时可见细胞外基质成分保留,免疫组织化学显示Ⅰ型胶原蛋白、层粘连蛋白保留;原代培养的大鼠骨髓源性内皮祖细胞CD31、CD133、VEGF免疫荧光阳性;构建出由蠕动泵、氧合器、培养瓶、输送管道组成的循环灌注培养体系;成功将内皮祖细胞通过门静脉途径种植到脱细胞支架内,HE、CD31显示内皮祖细胞定植于脱细胞支架管腔内壁。结论通过循环灌注培养能够成功将原代大鼠内皮祖细胞种植于大鼠肝脏脱细胞管腔内壁。