胰岛素样生长因子结合蛋白3通过线粒体途径诱导软骨细胞凋亡

摘要

目的观察外源性胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）对诱导软骨细胞凋亡的效应,探讨其是否通过"细胞核内蛋白Nur77-线粒体易位途径"诱导凋亡。方法原代培养大鼠软骨细胞并传代2～3次后,转入无血清培养培养环境,添加不同浓度的外源性IGFBP-3以及设置对照组,同时处理24 h后,分别通过普通及荧光显微镜观察IGFBP-3对软骨细胞的形态学影响、细胞计数试剂盒（CCK-8）吸光度法和流式细胞仪检测软骨细胞凋亡比例、激光共聚交显微镜观察IGFBP-3诱导细胞核内受体Nur77。结果 （1）原代培养的单个软骨细胞贴壁后呈不规则多边形,生长至融合时呈"铺路石样",经过数次传代,细胞由多边形逐渐伸展为成纤维细胞样;（2）普通明场和荧光显微镜下,均可见凋亡小体,表明外源性IGFBP-3软骨细胞能诱导软骨细胞凋亡;（3）CCK-8数值:空白组为1.43±0.03;阴性对照组为1.44±0.05;IGFBP-3组（0.5、1.0μg/ml与2.0μg/ml）分别为1.31±0.03、1.06±0.07、0.82±0.10;空白组与阴性对照组差异无统计学意义（P=0.845）,IGFBP-3组内差异有统计学意义（P=0.000、0.000）,IGFBP-3组与空白组和阴性对照组分别差异有统计学意义（P=0.000）;（4）流式细胞仪结果:空白组为97.57%;阴性对照组为97.63%;IGFBP-3组（0.5～2.0μg/ml）分别为90.03%、80.03%和67.33%,统计学分析结果同CCK-8;（5）激光共聚交显微镜观察表明,IGFBP-3处理组中,细胞核内受体Nur77从细胞核易位至线粒体,而空白组和阴性对照组均未见此现象。结论 IGFBP-3可通过诱导Nur77从细胞核易位至线粒体,从而诱导软骨细胞凋亡。