肿瘤相关成纤维细胞自噬调节对共培养大肠癌细胞侵袭、迁移能力的影响

摘要

目的通过调控肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）的自噬状态,观察对共培养大肠癌细胞的侵袭、迁移能力的影响。方法取大肠癌患者原代培养的CAFs,微管相关蛋白1轻链3（LC3）免疫荧光法检测CAFs的自噬状态;筛选自噬上调剂雷帕霉素与自噬抑制剂巴弗洛霉素的最佳作用时间与剂量,分别对CAFs进行自噬调控;通过细胞侵袭实验和细胞划痕实验观察不同CAFs自噬状态对大肠癌侵袭与迁移能力的影响;通过对肿瘤细胞抑癌基因p53、B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、bcl-2相关x蛋白（bax）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、核因子（NF）-KB等蛋白的检测,探讨自噬调控CAFs影响大肠癌细胞侵袭、迁移能力的可能机制。结果未自噬干预的CAFs培养12、24及48 h后,噻唑蓝（MTT）检测吸光度（A）值最大时间为48 h;400 nmol/L雷帕霉素可进一步增加CAFs自噬,Western blot检测结果显示损伤调节白噬调控因子（DRAM）、自噬相关基因Atg5及Beclin-1、LC3等自噬相关基因表达上调,而400 nmol/L巴弗洛霉素可抑制CAFs自噬水平,DRAM、Atg5与Beclin-1基因表达下调;各组细胞于Transwell中进行共培养48 h后,发现穿过小室肿瘤细胞以雷帕霉素预处理CAFs+CCL244组最多[（172.0±9.3）个],巴弗洛霉素预处理CAFs+CCL244最少[（52.0±5.0）个];细胞迁移实验结果显示雷帕霉素预处理组CCL244细胞向划痕处迁移程度最明显[（15.34±0.49）mm],明显高于巴弗洛霉素预处理组[（10.32±1.08）mm];自噬上调组细胞的bcl-2、NF-KB基因表达上调,而bax、p53及Caspase-3表达下调,自噬下调组相反。结论上调CAFs自噬水平,可增强共培养大肠癌细胞侵袭、迁移能力;而抑制CAFs自噬水平,可降低共培养大肠癌细胞侵袭、迁移能力。