趋化因子受体6在食管癌组织的表达及对食管癌细胞上皮-间充质转化的影响

摘要

目的观察趋化因子受体6（CCR6）在食管癌组织的表达及其对食管癌细胞上皮-间充质转化（EMT）的影响。方法应用免疫组织化学技术检测99例食管鳞状细胞癌和11例食管正常组织中CCR6、E-钙黏蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的表达,分析其与临床病理特征的相关性。应用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测人食管癌细胞株ECA-109、TE-1及正常食管细胞株HEEC中CCR6的表达。应用细胞计数试剂盒（CCK-8）、划痕和Transwell实验检测CCR6对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。应用RT-qPCR和Western blot实验测定CCR6-CCL20趋化作用对食管癌细胞EMT的影响。结果CCR6在食管癌细胞株中高表达与正常食管细胞株中低表达,差异有统计学意义（8.00±1.23、4.57±1.12比1.00±0.32,t=11.000,P=0.000;t=6.100,P=0.001）。CCR6在淋巴结转移组和未转移组的阳性表达率分别为87.1%和63.8%（P=0.020）;在TNM分期级别高组和级别低组的阳性表达率分别为87.9%和62.5%（P=0.038）。食管癌细胞经CCL20刺激后,增殖能力显著降低,差异有统计学意义（0.35±0.02比0.49±0.03,t=7.003,P=0.002;0.38±0.033比0.48±0.04,t=3.719,P=0.021）。ECA-109划痕24 h后,CCL20组的愈合速度显著升高,差异有统计学意义（1.34±0.02比1.00±0.04,t=4.680,P=0.009）,封闭CCR6,愈合速度明显降低（1.36±0.06比1.00±0.04,t=4.344,P=0.012）。ECA-109细胞Transwell实验结果显示:CCL20组细胞穿膜数量显著增高,差异有统计学意义（401.33±20.00比239.33±21.18,t=5.560,P=0.005）;封闭CCR6后,穿膜细胞数量显著降低（311.33±12.12比401.33±20.00,t=3.849,P=0.018）。CCL20刺激后,ECA-109中E-cadherin的mRNA和蛋白表达显著降低（t=9.758,P=0.001）、Vimentin的表达显著升高（t=6.352,P=0.003）;封闭CCR6,E-cadherin的mRNA和蛋白表达显著升高（t=7.707,P=0.002）、Vimentin表达显著降低（t=6.095,P=0.004）。结论CCR6在食管癌淋巴结转移患者中呈高表达,CCR6及CCR6-CCL20趋化轴参与调控肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移,可能参与调节食管癌细胞EMT的发生。