Ⅱ型大麻素受体选择性抑制剂对钛颗粒诱导破骨细胞活化的作用

摘要

目的观察Ⅱ型大麻素受体（CB2）选择性抑制剂AM630对钛颗粒（Ti）诱导炎性破骨细胞（OC）活化的影响。方法实验分5组,即空白组、核因子-κB（NF-κB）受体活化因子配体（RANKL）组、Ti组、R+Ti组、药物组。采用噻唑蓝（MTT）法检测0.1 g/L Ti颗粒和不同浓度AM630（50、100、200 nmol/L）处理小鼠单核/巨噬细胞株RAW264.7后24、48、72 h细胞增殖活性;以0.1 g/L Ti颗粒和（或）50μg/L RANKL诱导RAW264.7,6 d时加入AM630再培养24 h,以抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色检测成熟OC,以逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测CB2、NF-κB受体活化因子（RANK）、肌酸磷酸激酶（CPK）基因mRNA含量,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测炎性因子白细胞介素（IL）-1β和肿瘤坏死因子（TNF）-α表达水平。结果 MTT结果表明0.1 g/L Ti颗粒和（或）AM630（50、100、200 nmol/L）对RAW264.7细胞增殖能力无影响。TRAP染色,RANKL组、R+Ti颗粒组均可见大量的紫红色多核细胞;Ti组、药物组阳性细胞较少,统计分析结果表明AM630≥100 nmol/L时,TRAP阳性细胞数量与RANKL组[（181.80±14.23）/孔]比较差异有统计学意义（P＜0.05）。定量RT-PCR结果显示R+Ti组CB2、RANK以及CPK mRNA含量分别为11.26±1.39、9.68±0.91和9.93±0.56;药物组（100 nmol/L AM630）上述基因mRNA含量为4.73±0.55、3.85±0.45和5.42±0.87,差异有统计学意义（P＜0.05）。ELISA结果显示,Ti颗粒加入24 h后IL-1β、TNF-α的含量分别为（176.9±9.2）、（159.7±8.2）ng/L;与药物组[IL-1β:（105.5±7.0）ng/L,TNF-α:（75.9±8.1）ng/L]比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论Ⅱ型大麻素受体选择性抑制剂AM630能够抑制Ti颗粒引起的炎性破骨细胞活化。