羊膜上皮细胞培养液抑制角膜基质细胞凋亡的实验研究

摘要

目的对羊膜上皮细胞培养液抑制由肿瘤坏死因子(TNF-α)诱发的角膜基质细胞凋亡进行研究.方法体外培养兔角膜基质细胞(RCK),30 ng/ml TNF-α诱发角膜基质细胞凋亡.实验分为对照组、羊膜上皮细胞培养液组(羊膜组)和阴性对照组.应用FITC-dUTP-TUNEL和DAPI染色检测RCK细胞凋亡发生率,分别测定经24 h培养后各组细胞凋亡特异性DNA梯形降解.Western blot检测细胞凋亡保护性因子Bcl-2、促进因子Bax在经羊膜上皮细胞培养液处理后于细胞中表达强度及Bcl-2/Bax比值变化.结果羊膜上皮细胞培养液明显抑制由TNF-α诱发的兔角膜基质细胞凋亡,DAPI染色显示24 h对照组,羊膜培养液组和阴性对照组细胞凋亡发生率分别为:42.4%±4.3%,2.2%±0.3%和2.7%±0.4%.DNA降解实验显示羊膜上皮细胞培养液明显抑制TNF-α诱导的DNA片段降解.Western blot显示羊膜上皮细胞培养液明显刺激RCK细胞Bcl-2蛋白的表达和分泌.结论羊膜培养液中可能释放的多种细胞因子对TNF-α诱发的角膜基质细胞凋亡具有明显的抑制作用,其作用机制之一是刺激Bcl-2在RCK细胞的表达,并使Bcl-2/Bax比值上调.