Src-家族酪氨酸激酶特异性抑制剂对H2 O2介导的晶状体上皮细胞Ca2+内流的影响

摘要

目的 观察 Src-家族酪氨酸激酶(SFK)抑制剂PP1对H2O2诱导的晶状体上皮细胞(LECs)内游离钙离子(Ca2+)浓度变化的影响.方法 用Ca2+荧光探针Fluo-3/AM负载人晶状体HLE-B3,用激光共焦显微镜观察在不同浓度H2O2刺激后细胞内Ca2+的荧光强度变化;进一步用0.1nmol/L PP1、0.3μmol/(L·min)过氧化氢酶和DMSO分别预处理细胞,观察在常规Ca2+、低Ca2+和高Ca2+培养基条件下H2O2刺激后细胞内Ca2+荧光强度的变化,评价PP1对H2O2诱导的LECs内Ca2+的作用.结果 不同浓度H2O2刺激后细胞内游离Ca2+浓度升高,呈剂量依赖效应.用0.1mmol/L H2O2刺激细胞,在常规Ca2+培养基中,PP1组和过氧化氢酶组细胞内Ca2+荧光强度增长幅度与DMSO组比较分别降低(28.5±4.2)%、(33.8±3.7)%,差异均有统计学意义(q=3.73,P＜0.05;q=4.21,P＜0.05).在低Ca2+培养基中,3个组细胞内Ca2+荧光强度增强均不明显;在高Ca2+培养基中,PP1组、过氧化氢酶组的荧光强度增加幅度较DMSO组分别降低(13.5±1.8)%和(21.3±2.4)%(q=5.58,P＜0.01;q=7.11 P＜0.01).常规Ca2+和高Ca2+培养基中,PP1组和过氧化氢酶组细胞内Ca2+荧光强度增长幅度的差异均无统计学意义(q=3.04,P＞0.05;q=2.76,P＞0.05).结论 SFK特异性抑制剂PP1能有效抑制H2O2诱导的LECs的Ca2+内流,从而阻断依赖Ca2+激活的信号转导途径,阻止皮质性白内障的发生.