白细胞介素1、白细胞介素6及肿瘤坏死因子α对人晶状体上皮细胞移行的作用

摘要

背景晶状体上皮细胞（LECs）在保持晶状体的透明性方面发挥重要的作用。研究表明炎症反应参与了一些类型白内障的形成过程，且炎性因子对LECs的生物学行为产生影响，但其对LECs移行的影响尚不明确。目的探讨白细胞介素1d（IL-1d）、IL-1B、IL-6、肿瘤坏死因子α（TNF—α）及4种炎性因子混合物对人LECs细胞系HLEB-3迁移的影响。方法HLEB-3细胞用含质量分数0．5％胎牛血清的DMEM培养液进行饥饿培养，将10μg/L的IL—1α、IL—1β、IL-6、TNF—α及这4种炎性因子的混合物分别加入培养液中作用24h后进行细胞划痕实验和Transwell实验。于上述因子处理后即刻和24h在倒置显微镜下观察并用数码相机记录划痕区，在200倍显微镜下计数划痕线内移行的细胞数量。Transwell实验24h后取出小室用质量分数4％多聚甲醛溶液固定15min，草酸铵结晶紫溶液染色2min，于倒置显微镜下观察，选取12：00、3：00、6：00和9：00位以及中心部位5个观察区在200倍显微镜下进行细胞计数，以评价炎性因子对LECs移行的作用。用仅含0．5％胎牛血清的DMEM培养液进行培养的LECs作为空白对照组。结果划痕实验结果表明，各种炎性因子作用后24h，对照组划痕区LECs数量明显低于IL-1β作用组及TNF—α作用组，差异均有统计学意义（P=0．000、0．000），混合因子组划痕区细胞数量均明显高于IL-1β作用组及TNF-α作用组，差异均有统计学意义（P=0．000、0．000）；IL-1α作用组、IL-6作用组与对照组比较，划痕区细胞数量差异均无统计学意义（P=0．600、0．098）。Transwell实验显示，混合因子组作用24h小室膜下层LECs密度最大，与IL-α作用组、TNF—α作用组相比差异均有统计学意义（P=0．000、0．000），且IL-α作用组、TNF—α作用组小室膜下层LECs数量均多于对照组，差异均有统计学意义（P=0.000、0．000）。IL—1α作用组和IL-6作用组可见少量穿膜细胞的生长和迁移，与对照组相比差异均无统计学意义（P=0．056、0．327）。结论IL-1α和IL-6对LECs的移行无明显影响，ILα和TNF—α能够促进LECs移行，当多种炎性因子共同作用时促进LECs移行的作用强于单个细胞因子。