HAV 3a与3d融合蛋白在原核系统中的表达及其抗原活性的研究

摘要

目的研究HAV 3a(位于1 403～1 456aa)与3d(位于1 719～1 764aa)融合蛋白在原核系统中的表达,并探讨该重组蛋白的抗原活性及其应用价值.方法采用常规PCR方法,从克隆有HAV HM175株全长cDNA基因的克隆载体pHAV16H1上扩增出目的基因,以pET-30a作为表达载体,构建重组表达质粒pET-3ad.该重组质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达.采用镍金属柱螯和亲和层析纯化的方法对重组蛋白进行纯化.以Western blot和间接ELISA的方法检测重组蛋白的抗原活性.结果重组质粒pET-3ad经双酶切(NcoⅠ/Hind Ⅲ)鉴定和序列测定证实构建成功.在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达有一相对分子质量为18 000的重组蛋白P3ad,该蛋白经亲和层析获得了良好的纯化效果.Western blot结果显示在相对分子质量为18 000处有一特异的免疫印迹条带,表明重组蛋白P3ad具有特异的抗原活性;间接ELISA方法进一步证实了该蛋白的抗原性.结论采用常规的克隆操作方法构建了重组表达质粒pET-3ad,其表达量为20%.表达产物具有良好的抗原性,有望应用于急性HAV感染的诊断和区分活病毒的感染及灭活疫苗的免疫.