HIV-1中国株CN54 Gag蛋白在毕赤酵母中的表达纯化和鉴定

摘要

目的利用毕赤酵母表达系统高效表达HIV-1中国株CN54的Gag蛋白,初步确立发酵和纯化工艺.方法PCR扩增CN54 Gag基因,插入毕赤酵母表达载体pPS1.0,电转化毕赤酵母菌株GS115,G418筛选高表达工程菌,利用5L发酵罐进行高密发酵,通过SP Sepharose FF和DEAE Separose FF柱层析,用HIV-1阳性血清和p24抗原检测试剂盒对纯化后的Gag蛋白进行免疫学性质的鉴定.结果构建了高效表达CN54 Gag蛋白的毕赤酵母工程菌株,发酵罐培养的菌体密度吸光度(A600值)超过300,Gag蛋白表达量达到120 mg/L.纯化后的Gag蛋白纯度高于90%,p24检测强阳性并能够与HIV-1阳性血清发生特异的抗原抗体结合反应.结论本研究在毕赤酵母中高效表达了HIV-1中国株CN54的Gag蛋白,并进行了纯化和鉴定,为针对我国新一代HIV蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础.