酵母双杂交技术筛选乙型肝炎病毒DNA聚合酶TP结合蛋白的研究

摘要

目的筛选与乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶-N末端蛋白(TP)相互结合的肝细胞蛋白,进一步探讨TP的生物学功能.方法用聚合酶链反应(PCR)技术扩增TP片段,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH 109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖苷酶(X-α-gel)上进行双重筛选阳性菌落,DNA序列测定并进行生物信息学分析.结果成功获得了47个与TP特异性结合的阳性克隆,包括人类固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、RNA聚合酶Ⅱ亚单位(hsRPB7)、血浆铜蓝蛋白(CP)等21种已知功能蛋白质基因和19个假设蛋白基因.结论HBV DNA聚合酶-TP可以与某些已知和未知功能蛋白相互结合,提示其具有较广泛的生物学功能.