慢性氟中毒大鼠脑组织GFAP、 β-tubulin Ⅲ和synaptophsin表达水平及硫酸软骨素干预作用

摘要

目的 观察慢性氟中毒大鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、β-微管蛋白Ⅲ(β-tubulin Ⅲ)和突触素(synaptophsin)表达水平,探索三复合体突触在慢性氟中毒大鼠中枢神经系统(CNS)损伤机制中的作用,以及硫酸软骨素(CS)的神经保护作用.方法 选择1月龄清洁级SD大鼠雌雄各48只,按体重(90～ 120g)采用随机数字表法分为8组,每组12只,雌雄各半.采用含有不同浓度氟化钠(NaF)的自来水[＜0.5 mg/L(对照,CN),10.0 mg/L(低剂量染氟,LF),50.0 mg/L(高剂量染氟,HF)]喂养,其中部分大鼠直接喂养185 d(CN、LF、HF组),其余大鼠于喂养180 d后连续5d腹腔注射生理盐水(NS)或染氟大鼠腹腔注射0.66mg/kg CS,分别为CN+ NS、LF+ NS、HF+ NS组和LF+ CS、HF+ CS组.实验结束后采用苏木素-伊红染色于光镜下观察各组大鼠脑组织海马CM区病理改变,免疫组织化学法检测海马CA4区GFAP、β-tubulin Ⅲ和synaptophsin的表达及分布,蛋白免疫印迹法检测海马GFAP、β-tubulin Ⅲ和synaptophsin蛋白表达水平.结果 光镜下LF、HF、LF+ NS、HF+ NS组雌、雄性大鼠海马CA4区均可见神经元嗜酸性变、丢失和排列层次不整齐,LF+CS、HF+ CS组较CN组形态学未见明显改变,而较LF、HF、LF+ NS、HF+ NS组有明显改善.免疫组织化学法检测结果显示,LF、HF组雌、雄性大鼠GFAP、β-tubulin Ⅲ、synaptophsin阳性面积率均低于CN组(P均＜0.05);而LF+ CS、HF+ CS组分别高于LF、HF组(P均＜0.05).蛋白免疫印迹法检测结果显示,LF、HF组雌、雄性大鼠GFAP、β-tubulin Ⅲ、synaptophsin蛋白表达水平(LF组:0.90±0.09、0.82±0.08,1.43±0.14、0.92±0.02,1.21±0.15、0.87±0.02,HF组:0.58±0.14、0.73±0.03,0.63±0.06、0.67±0.03,0.87±0.04、0.70±0.05)均低于CN组(1.24±0.08、1.09±0.10,2.64±0.30、1.54±0.09,1.72±0.10、1.13±0.06,P均＜0.05).结论 慢性氟中毒引起的CNS损伤可能与三复合体突触以及细胞外基质有关,CS可能在一定程度上降低损伤.