氟砷联合对成骨与破骨细胞共培养体系中TRAF-6介导的NF-κB1信号通路相关蛋白表达的影响

摘要

目的 探讨氟、砷及氟砷联合染毒对小鼠成骨细胞MC3T3-E1与小鼠单核巨噬细胞RAW264.7共培养体系中肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF-6）/核因子κB1（NF-κB1）信号通路中相关蛋白表达的影响。方法 MC3T3-E1细胞经成骨诱导剂诱导后与RAW264.7细胞建立共培养体系,体外培养7 d,采用析因设计,分别用不同剂量的氟化钠（0.0、0.1、0.4、1.6 mmol/L NaF,F）、亚砷酸钠（0.0、0.5、2.5、12.5 μmol/L NaAsO2,As）以及不同剂量的氟砷联合培养基培养24 h。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测核因子κB受体活化因子（RANK）、TRAF-6、NF-κB1、T细胞活化因子（NFATc1）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的蛋白表达水平。结果 氟单独作用时,与对照组（F0.0As0.0,1.00 ± 0.00）比较,各剂量组RANK、NF-κB1、TRAP蛋白表达（1.11 ± 0.04、1.29 ± 0.05、1.38 ± 0.04,1.24 ± 0.04、1.13 ± 0.03、1.34 ± 0.05,1.12 ± 0.03、1.24 ± 0.04、1.61 ± 0.06）增加（P均＆ 0.05）；TRAF-6蛋白表达在F0.1和F1.6组（1.23 ± 0.04、1.35 ± 0.03）增加（P均＆ 0.05）。砷单独作用时,与对照组（F0.0As0.0）比较,RANK、TRAF-6、NF-κB1蛋白表达在As0.5组增加（P均＆ 0.05）,RANK和NFATc1蛋白表达在As12.5组减少（P均＆ 0.05）。氟砷联合作用时,同一染氟剂量,RANK蛋白表达在F0.1As0.5组,TRAF-6蛋白表达在F0.1As12.5、F0.4As0.5、F0.4As2.5组,NF-κB1蛋白表达在F0.1As0.5、F0.4As2.5、F0.4As12.5组,NFATc1蛋白表达在F0.1As0.5、F0.4As0.5组,TRAP蛋白表达在F0.1As12.5组均高于相应的单独氟染毒组（F0.1、F0.4,P均＆ 0.05）,但低于氟、砷单独染毒之和。同一染砷剂量,RANK蛋白表达在F0.1As12.5组,TRAF-6蛋白表达在F0.1As12.5、F0.4As2.5组,NF-κB1蛋白表达在F0.1As12.5、F0.4As2.5、F0.4As12.5、F1.6As2.5组,TRAP蛋白表达在F1.6As2.5、F1.6As12.5组均高于相应的单独砷染毒组（As2.5、As12.5,P均＆ 0.05）,但低于氟、砷单独染毒之和。氟对RANK、TRAF-6、NF-κB1、NFATc1、TRAP蛋白表达均有主效应作用（F=3.41、341.73、66.01、56.49、147.40,P均＆ 0.05）；砷对各蛋白指标也均有主效应作用（F=686.71、174.96、107.32、235.80、331.37,P均＆ 0.05）；氟砷联合作用对各蛋白指标均有交互作用（F=50.39、234.94、116.72、67.77、36.56,P均＆ 0.05）。结论 在MC3T3-E1与RAW264.7细胞的共培养体系中,氟可激活TRAF-6介导的NF-κB1信号通路相关蛋白表达,从而促进破骨细胞分化；砷对相关蛋白表达作用不完全一致。氟砷联合染毒对TRAF-6介导的NF-κB1信号通路相关蛋白表达的交互作用主要表现为拮抗作用。