甲基化特异性聚合酶链反应检测粪便ppENK基因甲基化对胰腺癌诊断的可行性

摘要

目的评价甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测粪便ppENK基因高甲基化用于诊断胰腺癌的可行性。方法收集胰腺癌患者24例和对照6例的新鲜粪便标本。采用MSP检测全部粪便标本中ppENK的甲基化状态;采用PCR检测全部粪便标本中野生型ppENK的阳性率。采用PCR-限制性片段长度多态性（RFLP）检测粪便K-ras的突变情况。将胰腺癌细胞PC3单细胞悬液加入同一健康者粪便标本,MSP法检测ppENK甲基化阳性,计算甲基化阳性时需掺入的胰腺癌细胞的最少数量。结果 30份粪便标本的甲基化检出率为0（0/30）,非甲基化检出率为10%（3/30）,野生型ppENK检出率为6.7%（2/30）;PCR-RFLP可检测出所选10份野生型ppENK阴性的胰腺癌标本中的8份,其中7份有K-ras第12位密码子突变。MSP方法能够检测到粪便中ppENK甲基化条带所需胰腺癌细胞的数量至少为50个/ml。结论采用MSP方法检测胰腺癌患者粪便标本的ppENK基因甲基化状态,尚不能成为筛查和诊断胰腺癌的方法。