雨蛙肽诱导的实验性急性胰腺炎细胞模型中酶噬的变化

摘要

目的观察雨蛙肽诱导的实验性急性胰腺炎（AP）细胞模型中酶噬的变化。方法培养AR42J细胞株（胰腺外分泌细胞）,将细胞接种于6孔板培养至90%融合,分为AP组与空白对照组,AP组加入终浓度为1×10-8mol/L的雨蛙肽建立AP细胞模型,空白对照组加入1640培养液。在雨蛙肽处理后1、4、6、8、12、24 h收集细胞及培养上清液,以ELISA方法检测上清液中炎性因子IL-1、TNFα、淀粉酶及胰蛋白酶原活化肽（TAP）水平。取各组细胞,采用RT-PCR和Western印迹法检测LC3、Beclin-1mRNA和LC3B蛋白的表达。透射电子显微镜观察各组细胞酶噬小体的变化。组间比较采用方差分析。结果空白对照组上清液中的IL-1、TNFα、淀粉酶和TAP分别为（18.83±7.10）pg/mL、（14.20±3.79）pg/mL、（10.03±2.85）U/L、（39.48±8.62）pg/mL,AP组在1 h时即显著升高至（62.13±11.25）pg/mL,（30.98±7.11）pg/mL、（25.06±6.82）U/L、（128.51±18.30）pg/mL,差异均有统计学意义（F=3.32、3.05、2.90、2.62,P＜0.05或0.01）在4或6 h时达到高峰[IL-1在4 h为（71.96±15.82）pg/mL,F=7.25,P＜0.01;TNFα在6 h时为（39.92±8.94）pg/mL,F=4.93,P＜0.05;淀粉酶在4 h时为（28.83±8.31）U/L,F=2.06,P＜0.05;TAP在4 h时为（146.29±29.36）pg/mL,F=0.14,P＜0.01],之后逐渐下降趋于稳定,AP组细胞中第4、6 h的LC3 mRNA含量为3.18±0.82、1.71±0.14,第1、4 h时的Beclin-1 mRNA含量为2.44±0.34、4.13±0.30,较空白对照组（0.21±0.04、0.30±0.08）均明显上升（LC3 mRNA,F=0.79、0.06;Beclin mRNA,F=2.31、0.36,P均＜0.05）,其余时间点差异均无统计学意义（P均＞0.05）。电子显微镜下可见AP组自噬体和酶噬小体数目显著多于空白对照组。结论雨蛙肽诱导AP细胞模型时伴有酶噬的发生,提示酶噬可能参与了AP的发病机制。