基因静默对肠易激综合征内脏高敏感大鼠肠道树突状细胞免疫功能的影响

摘要

目的了解PDIA3基因在IBS内脏高敏感大鼠结肠黏膜异常免疫应答中的作用及机制。方法将48只成年SD大鼠分为空白对照组、空病毒组（IBS-1）、PDIA3基因静默组（IBS-2）和模型对照组（IBS-3）,每组各12只。免疫组织化学法检测回盲部结肠组织表面分子CD103的表达,流式分选技术分离肠系膜淋巴结树突状细胞（DC）,磁珠分选技术分离脾脏CD4+/CD8+T淋巴细胞,DC和CD4+/CD8+T淋巴细胞共培养,MTT法检测DC促淋巴细胞增殖能力,ELISA法检测I)C促CD4+/CD8+T淋巴细胞分泌IL-4、IL-9水平。统计学处理采用独立样本t检验。结果大鼠肠道CD103标记的DC计数在空白对照组为（6.25±1.14）个/高倍镜视野（HPF）,低于IBS-3组的（10.83±1.03）个/HPF（t=10.07,P＜0.05）;IBS-2组为（7.42±0.90）个/HPF,低于IBS-3组,差异有统计学意义（t=-9.25,P＜0.05）。空白对照组和IBS-3组大鼠DC促进CD4+T淋巴细胞增殖的MTT值分别为0.54±0.01和0.60±0.01（t=3.373,P＜0.05）;IBS-2组为0.53±0.01,低于IBS-3组,差异有统计学意义（t=-3.139,P＜0.05）;DC促进CD8+T淋巴细胞增殖的MTT值分别为0.52±0.01和0.59±0.00（t=3.539,P＜0.01）;IBS-2组为0.54±0.01,低于IBS-3组,差异有统计学意义（t=-3.183,P＜0.01）。空白对照组和IBS-3组大鼠DC促CD4+T淋巴细胞分泌IL-4水平分别为10.24±0.09和16.61±1.00（t=3.222,P＜0.05）;IBS-2组为11.75±0.54,低于IBS-3组,差异有统计学意义（t=-3.539,P＜0.01）。空白对照组和IBS-3组大鼠DC促CD4+T淋巴细胞分泌IL-9水平分别为15.86±10.19和43.51±11.32（t=4.529,P＜0.05）;IBS-2组为29.05±2.09,低于IBS-3组,差异有统计学意义（t=-6.841,P＜0.01）。空白对照组和IBS-3组大鼠DC促CD8+T淋巴细胞分泌IL-4水平分别为7.35±0.12和13.91±0.57（t=19.557,P＜0.01）;IBS-2组为8.63±0.24,低于IBS-3组,差异有统计学意义（t=-14.782,P＜0.01）。空白对照组和IBS-3组大鼠DC促CD8+T淋巴细胞分泌IL-9水平分别为29.12±5.14和60.70±11.02（t=4.122,P＜0.05）;IBS-2组为37.17±2.65,低于IBS-3组,差异有统计学意义（t=-3.255,P＜0.05）。结论 PDIA3可能介导DC激活T淋巴细胞,上调相关细胞因子水平,导致肠黏膜异常免疫应答,促进1BS内脏高敏感形成。