基于TGF-β1/CTGF信号通路探讨山茱萸总甙对人骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响

摘要

目的 基于转化生长因子-β1(TGF-β1)/结缔组织生长因子(CTGF)信号通路观察山茱萸总甙对人骨关节炎(OA)软骨细胞增殖和凋亡的影响.方法 2020年4—5月于海南省儋州市人民医院实验室进行实验.取软骨组织培养软骨细胞,而后分为OA软骨细胞组、罗非昔布组(200μg/ml)及山茱萸总甙低、高剂量组(200、400μg/ml);各组细胞分别设6个平行样,培养72 h.培养结束后,噻唑蓝(MTT)染色测定细胞活力,吉姆萨染色测定细胞群落数,流式细胞仪测定细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及免疫印迹(WB)法测定OA软骨细胞TGF-β1、CTGF mRNA和蛋白表达水平.结果 与OA软骨细胞组比较,罗非昔布组及山茱萸总甙低、高剂量组OD值、存活率、群落数明显升高(F/P=15.635/0.000、54.547/0.000、156.632/0.000),凋亡率、TGF-β1及CTGF的mRNA和蛋白表达水平明显降低(F/P=54.236/0.000、36.214/0.000、39.365/0.000、19.541/0.000、23.547/0.000);与罗非昔布组比较,山茱萸总甙低剂量组OD值、存活率、群落数明显降低(q/P=8.954/0.000、8.321/0.000、149.651/0.000),凋亡率及TGF-β1、CTGF mRNA和蛋白表达水平明显升高(q/P=23.458/0.000、8.654/0.000、14.548/0.000、15.458/0.000、22.154/0.000);山茱萸总甙高剂量组OD值、存活率、群落数、凋亡率及TGF-β1、CTGF mRNA和蛋白表达水平与罗非昔布组比较差异无统计学意义(P>0.05);且山茱萸总甙高剂量组OD值、存活率、群落数高于山茱萸总甙低剂量组(q/P=10.654/0.000、8.324/0.000、89.695/0.000),凋亡率及TGF-β1、CTGF mRNA和蛋白表达水平低于山茱萸总甙低剂量组(q/P=38.419/0.000、16.874/0.000、25.654/0.000、19.545/0.000、26.524/0.000).结论 山茱萸总甙能明显促进人骨关节炎软骨细胞增殖,抑制其凋亡,且呈剂量依赖性;其机制与山茱萸总甙抑制人骨关节炎软骨细胞TGF-β1/CTGF信号通路激活有关.