卵巢滤泡激素在干扰素γ介导的黑素细胞凋亡以及趋化因子分泌中的作用研究

摘要

目的研究卵巢滤泡激素（FLCN）在干扰素γ（IFN-γ）介导的黑素细胞凋亡及趋化因子分泌中发挥的作用。方法从正常人包皮环切组织及白癜风移植患者正常部位的吸疱表皮分离正常原代黑素细胞及白癜风原代黑素细胞。采用Western印迹检测正常原代黑素细胞、白癜风原代黑素细胞及人原代黑素细胞系PIG1细胞中FLCN蛋白的表达。以10 ng/ml IFN-γ刺激48 h的PIG1细胞为诱导组, 未经处理的PIG1细胞为对照组, 采用qRT-PCR检测两组细胞FLCN及自噬相关微管相关蛋白1轻链3（LC3）Ⅱ、Beclin基因mRNA表达, Western印迹检测FLCN、Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ水平及腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的磷酸化水平。进一步对采用10 ng/ml IFN-γ刺激的黑素细胞感染FLCN抑制病毒进行不同的处理, 分为阴性对照组、FLCN抑制组、抑制FLCN及添加mTOR抑制剂的自噬增强组和抑制FLCN及添加AMPK抑制剂的自噬抑制组。采用流式细胞仪检测各组PIG1细胞凋亡, 酶联免疫吸附实验检测各组细胞上清液中趋化因子CXCL10和CCL20的浓度。多组间计量资料比较采用单因素方差分析, 组间比较采用LSD-t检验。结果正常原代黑素细胞（0.850 ± 0.120）、白癜风原代黑素细胞（1.507 ± 0.170）和PIG1细胞（0.697 ± 0.130）FLCN蛋白的相对表达差异有统计学意义（F = 50.09, P ＆ 0.001）, 白癜风原代黑素细胞高于正常原代黑素细胞和PIG1细胞（t = 4.06、5.89, 均P ＆ 0.01）。诱导组FLCN mRNA及蛋白相对表达均高于对照组（均P ＆ 0.01）, LC3Ⅱ、Beclin mRNA及蛋白相对表达均低于对照组（均P ＆ 0.01）;诱导组PIG1细胞LC3Ⅱ/Ⅰ水平（0.72 ± 0.02）、AMPK磷酸化水平（0.714 ± 0.023）低于对照组（1.13 ± 0.02、1.176 ± 0.002, t = 7.34、6.67, 均P ＆ 0.01）, mTOR磷酸化水平（1.051 ± 0.023）高于对照组（0.451 ± 0.016, t = 3.81, P = 0.009）。对照组、诱导组及各处理组PIG1细胞凋亡率及CXCL10、CCL20浓度差异均有统计学意义（均P ＆ 0.001）, 诱导组高于对照组, FLCN抑制组低于阴性对照组, 自噬增强组低于FLCN抑制组, 自噬抑制组高于FLCN抑制组（均P ＆ 0.05）。结论白癜风黑素细胞中高表达FLCN, FLCN表达以及下游信号通路受IFN-γ调控, FLCN可通过调节自噬参与IFN-γ介导的黑素细胞凋亡和趋化因子分泌。