H2O2对人皮肤成纤维细胞衰老标记蛋白30及自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达的影响

摘要

目的探讨H2O2对人皮肤成纤维细胞（NHSF）衰老标记蛋白30（SMP30）以及细胞自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ型（LC3Ⅱ）的影响。方法用150 μmol/L H2O2处理2～4代NHSF 2 h, 构建细胞衰老模型作为H2O2组, 而未处理的NHSF作为对照组。细胞衰老β半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色法检测衰老细胞比例, 间接免疫荧光检测自噬相关蛋白LC3的表达, 反转录PCR（RT-PCR）检测SMP30 mRNA的表达, Western印迹法检测SMP30和LC3蛋白的表达。结果 H2O2组NHSF的SA-β-gal染色阳性率（41.70% ± 2.95%）显著高于对照组（3.03% ± 0.25%, t = 22.59, P ＆ 0.05）。间接免疫荧光结果显示, H2O2组NHSF LC3阳性率（12.60% ± 1.57%）明显低于对照组（23.67% ± 3.04%, t = 5.61, P ＆ 0.05）。Western印迹显示, H2O2组LC3Ⅰ/GAPDH比值（0.40 ± 0.02）与对照组（0.41 ± 0.04）比较差异无统计学意义（P ＆ 0.05）, 而H2O2组LC3Ⅱ/GAPDH比值（0.20 ± 0.02）明显低于对照组（0.80 ± 0.03, t = 29.69, P ＆ 0.05）, 且H2O2组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值（0.51 ± 0.03）亦明显低于对照组（1.98 ± 0.23, t = 10.967, P ＆ 0.05）。H2O2组SMP30 mRNA和蛋白水平（与GAPDH mRNA和蛋白的比值分别为0.16 ± 0.01和0.27 ± 0.02）明显低于对照组（分别为0.35 ± 0.01和0.63 ± 0.02）, 均P ＆ 0.05。结论 H2O2可降低NHSF中SMP30及LC3Ⅱ的表达水平, 加速NHSF衰老。